隨機擴增多態性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA)
關鍵詞: Amplified Polymorphic來源: 互聯網
原理:
此技術建立于PCR基礎之上,使用一系列具有10個左右堿基的單鏈隨機引物,對基因組的DNA全部進行PCR擴增,以檢測多態性。由于整個基因組存在眾多反向重復序列,因此須對每一隨機引物單獨進行PCR。
單一引物與反向重復序列結合。
使重復序列之間的區域得以擴增。
引物結合位點DNA序列的改變以及兩擴增位點之間DNA堿基的缺失、插入或置換均可導致擴增片段數目和長度的差異,經聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳分離后通過EB染色以檢測DNA片段的多態性。
RAPD的缺點:
RAPD圖譜中某些弱帶重復性較差,而且目前該法在引物長度和序列及應用的引物數目、擴增反應條件等實驗技術方面未標準化,影響了不同條件下結果的可比性;
每個標記含有的信息量小;有假陽性或假陰性結果;顯性標記,無法區分從一個位點擴增的DNA片段是純合的還是雜合的,無法進行等位基因分析。用在種以上類群間的比較時無法得到可靠的遺傳距離。
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