核糖核酸酶保護測定
關鍵詞: 核糖核酸酶 保護來源: 互聯網
1. 加入適當體積的RNA(<12 μl)+探頭(<3 μl)。
嘗試5和10μg 的RNA加600或800頁高辛標記的探針。
2. 包括2-3的酵母RNA樣品/探針使用。
3. 加入20 μl SOLN。 A到所有渦管(FV =30 μl)和自旋向下。
4. 孵育90-95℃,5分鐘使之變性。冰降速。
5. 在42-45'C在干燥的孵化器或水浴孵育O / N。
6. 核糖核酸酶消化:稀SOLN。 R在SOLN。 Bx的1:100。每個樣品中添加200 μl 。1:300稀釋增加66.7 μl 以上的SOLN133.4 μl。 BX。Bx的單獨以酵母RNA樣品。
7. 渦的所有樣本,然后降速。
8. 孵育在37℃長達30分鐘。渦然后停止運轉。
9. 添加300 μlSOLN。 DX。渦然后停止運轉。
10. 儲存于-20'C15分鐘。
推薦方法