一、分子雜交的概念：

分子雜交（molecular hybridization）指具有一定同源序列的兩條核酸單鏈（DNA或RNA），在一定條件下按堿基互補配對原則經過退火處理，形成異質雙鏈的過程。

利用這一原理，就可以使用已知序列的單鏈核酸片段作為探針，去查找各種不同來源的基因組DNA分子中的同源基因或同源序列。

二、分子雜交基本原理：

（一）DNA變性 :

DNA變性是指雙螺旋之間氫鍵斷裂，雙螺旋解開，形成單鏈無規則線團，因而發生性質改變（如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等）。

1、DNA變性的方法：

1）加熱；

2）改變DNA溶液的pH；

3）有機溶劑（如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等）等理化因素。

2、增色效應：

DNA在260nm處有最大吸收值，這一特征是由于含有堿基的緣故。在DNA雙螺旋結構模型中堿基藏于內側，變性時由于雙螺旋解開，于是堿基外露，260nm紫外吸收值因而增加，這一現象稱為增色效應（hyperchromic effect）。利用DNA變性后波長260nm處紫外吸收的變化可追蹤變性過程。

3、溶解曲線：

如果升高溫度使DNA變性，以溫度對紫外吸收作圖，可得到一條曲線，稱為溶解曲線。

4、融解溫度：

通常人們把50%DNA分子發生變性的溫度稱為變性溫度（即熔解曲線中點對應的溫度），由于這一現象和結晶的融解相類似，故又稱融點或融解溫度（melting temperature, Tm）。因此Tm是指消光值上升到最大消光值一半時的溫度。

5、影響Tm值的因素：

Tm不是一個固定的數值，它與很多因素有關：

1） 部因素：pH、離子強度。隨著溶劑內離子強度上升，Tm值也隨著增大。

2） 部因素：DNA的堿基比例、DNA的均一性；在相同條件下，DNA內G-C配對含量高，其Tm值也高。

6、DNA中的GC含量與Tm值關系：

Tm = 69.3+0.41 × % （G+C）

對于小于20bp的寡核苷酸，Tm=4（G+C）+2（A+T）

實驗表明DNA分子中（G+C）克分子含量百分比的大小與Tm值的高低呈直線關系。