關于質粒大小在電泳中的鑒定

?

用酚、氯仿法從工程菌中提取的質粒一般有三種構像，即超螺旋，線形和開環。（開環質粒是指雙鏈環狀的質粒DNA有部分解鏈，因此電泳速度最慢）三種構像的質粒在瓊脂糖電泳的前后順序是超螺旋>線形>開環，線形的質粒在中間，而開環的質粒在最后。 判斷質粒質粒好壞的一個指標就是超螺旋質粒在所以質粒中的含量。因為用質粒轉染真核細胞時，超螺旋的質粒效率最高，所以要求質粒中超螺旋質粒的含量要在90％以上，這也是對作為核酸疫苗重組質粒的要求。 根據我做實驗的經驗，回答你的問題 ? ? ? ? 1 從細菌中大量提取的質粒電泳時，不一定均出現三條帶，有時會出現兩條，甚至一條(一般是超螺旋的質粒)，這跟上樣量也有些關系。出現不同的結果都是由抽提質粒時的操作手法造成的。如果嚴格按照操作步驟，超螺旋的質粒會較多。 ? ? ? ? 2 酶切將質粒線性化以后，才可以用mark判斷大小。如果有三種構像，可以用中間那條帶與mark比較判斷大小。 ? ? ? ? 3 商品化的質粒我沒有直接跑過電泳。我估計應該大部分是超螺旋構像。 ? ? ? ? 4 酶切后線性化條帶電泳時所處的位置就指示質粒的大小。

?