CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物，只是不能沉淀核酸.通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。 注：CTAB溶液在低于15℃ 時會形成沉淀析出，因此，在將其加入冰冷的植物材料之前必須預熱，且離心時溫度不要低于15℃。 一、CTAB提取緩沖液的經典配方： Tris-HCl (pH8.0)提供一個緩沖環境，防止核酸被破壞； EDTA螯合Mg2+或Mn2+離子，抑制DNase活性； NaCl 提供一個高鹽環境，使DNP充分溶解，存在于液相中； CTAB溶解細胞膜，并結合核酸，使核酸便于分離； β-巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除。 二、CTAB提取緩沖液的改進配方： (1) PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的絡合物，能與多酚形成一種不溶的絡合物質，有效去除多酚，減少DNA中酚的污染；同時它也能和多糖結合，有效去除多糖； (2) 蛋白質的去除：酚/氯仿抽提使用變性劑變性(SDS、異硫氰酸胍等)高鹽洗滌蛋白酶處理核酸分離，純化； (3)多糖的去除：高鹽法：用乙醇沉淀時，在待沉淀溶液中加入1/2體積的5M NaCl，高鹽可溶解多糖。用多糖水解酶將多糖降解。在提取緩沖液中加一定量的氯苯(1/2體積)，氯苯可以與多糖的羥基作用，從而去除多糖。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA：在500 μL DNA液中加入200μl 20% PEG8000 (含1.2 M NaCl)，冰浴20min.核酸分離，純化； (4) 多酚的去除:在抽提液中加入防止酚類氧化的 試劑 ：β-巰基乙醇、抗壞血酸、半胱氨酸、二硫蘇糖醇等加入易與酚類結合的 試劑 ：如PVP(聚乙烯吡咯酮),PEG(聚乙二醇)，它們與酚類有較強的親和力，可防止酚類與DNA的結合； (5) 鹽離子的去除：70%的乙醇洗滌核酸吸附,沉淀和溶解使用合適的吸附材料吸附核酸，其它的雜質均被洗掉，達到純化DNA的目的另一種方式加入1/10體積的NaAc(pH5.2,3M)，用預冷的乙醇或異丙醇沉淀RNA吸附或沉淀后應用70%的乙醇洗滌，以除去鹽離子等若長期儲存建議使用TE緩沖液溶解TE中的EDTA能螯合Mg2+或Mn2+離子，抑制DNasepH值為8.0，可防止DNA發生酸解。 三、基因組DNA提取常見問題 DNA中含有蛋白、多糖、多酚類雜質。DNA在溶解前，有酒精殘留，酒精抑制后續酶解反應，DNA中殘留有金屬離子，有RNA的存留。對策：重新純化DNA，去除蛋白、多糖、多酚等雜質，重新沉淀DNA，讓酒精充分揮發，增加70%乙醇洗滌的次數(2-3次)，加入RNase降解RNA。 （1）DNA樣品不純，抑制后續酶解和PCR反應。DNA提取常見問題：材料不新鮮或反復凍融、未很好抑制內源核酸酶的活性、提取過程操作過于劇烈，DNA被機械打斷，外源核酸酶污染反復凍融。盡量取新鮮材料，低溫保存材料避免反復凍融，液氮研磨或勻漿組織后，應在解凍前加入裂解緩沖液。在提取內源核酸酶含量豐富的材料的DNA時，可增加裂解液中螯合劑的含量，細胞裂解后的后續操作應盡量輕柔。所有試劑用無菌水配制，耗材經高溫滅菌。將DNA分裝保存于緩沖液中,避免反復凍融。 （2）DNA降解，DNA提取常見問題。實驗材料不佳或量少，破壁或裂解不充分，吸附或沉淀不完全，洗滌時DNA丟失。盡量選用新鮮(幼嫩)的材料，動植物要勻漿研磨充分；G+菌，酵母裂解前先用 生物 酶或機械方式破壁。高溫裂解時，時間適當延長(對于動物細胞,細菌可增加PK的用量)。增加吸附的時間、或低溫沉淀小心操作。