【實驗目的】

學習和掌握常用基因組DNA提取方法。

【實驗要求】

1.設計所采用實驗方案并獨立完成所有實驗操作；

2.獲得高純度、完整DNA樣品。

一、原理：

利用含高濃度SDS的抽提緩沖液在較高溫度（55—65℃）條件下裂解植物細胞，使染色體離析，蛋白質變性，釋放出核酸，然后提高鹽濃度（KAc）和降低溫度（冰上保溫）的辦法沉淀除去蛋白質和多糖（在低溫條件下KAc與蛋白質及多糖結合成不溶物），離心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反復抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

二、藥品試劑及耗材：

—— 液氮 —— 提取緩沖液：500 mmol/L NaCl, 100 mmol/L Tris-HCl ph8, 50 mmol/L EDTA ph8，10 mmol/L 2-巰基乙醇（用前加入） ---- 20% SDS ph7.2 ---- 5 mol/L KAc ---- 氯仿：異戊醇（24：1） —— 異丙醇 —— 70%乙醇

—— TE緩沖液 :10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,PH8.0

耗材：

移液槍，15、2.0、1.5ml離心管，籃、黃、白槍頭各四套 離心管架4個，離心管盒2個，水浴泡沫8個，研缽及小藥勺8套

棉手套，薄膜手套，透明膠布，剪刀

三、操作程序

1. 將1 g植物材料于液氮速凍，然后在研缽中將其磨碎，將粉末轉至2 ml離心管中。

2. 加入1.2 ml預熱至65℃的提取緩沖液(3V)，輕緩振蕩混勻，加入120μl 20%SDS(達到終濃度2%)，混勻，置65℃水浴中放置30分鐘，不時顛倒混勻。

3. 加入0.45 ml 5M的醋酸鉀（1/10V），混勻，冰浴20分鐘，在10000 rpm離心20 min。需要的話，Miracloth紗布過濾除去沉淀，取上清液轉入另一離心管中。

4. 加入等體積氯仿：異戊醇（24：1），輕輕顛倒混勻， 12000 rpm離心15 min。

5. 轉移上清液到另一新離心管中，加入0.7V冰預冷異丙醇，輕輕顛倒混勻，（見絲狀沉淀）-20℃放置30分鐘沉淀核酸。

6. 25℃，12000 rpm，離心10 min，收集沉淀。

7. 棄上清，70％乙醇洗兩次。