一、實驗原理 CTAB（十六烷基三甲基溴化銨）是一種去污劑，可溶解細胞膜并能與核酸形成復合物，該復合物在高離子強度（0.7mol/L）的溶液里是可溶的，通過離心可將復合物同蛋白質、多糖類物質分開。在酚仿變性的條件下，去除殘留的CTAB和蛋白質等雜質，然后利用異戊醇或無水乙醇將DNA分子從上清溶液中沉淀出來，最后用TE溶解DNA，并加入RNA酶以去除基因組中的RNA，置于-20℃備用。因此，CTAB可以用于從大量產生粘多糖的有機體中提取核酸，例如：植物的葉片組織。 二、實驗材料及試劑

實驗材料：新鮮植物葉片。

試劑 與溶液：

CTAB提取緩沖液，Tris-飽和酚，氯仿-異戊醇（24:1），異丙醇，70%乙醇，含RNase 的TE溶液。 CTAB提取緩沖液：2%（M/V） CTAB，1.4M NaCl，100mM Tris-Cl（pH8.0），20mM EDTA，pH 8.0，2%（V/V）β-巰基乙醇（使用前加入）。 三、實驗步驟

取0.5 g 新鮮植物葉片置于研缽中，加入適量液氮，迅速研磨成均勻粉末。

將粉末移入1.5mL 離心管 ，加入800μL CTAB分離緩沖液，上下顛倒 離心管 ，混合均勻。

將盛有樣品的離心管置于65℃ 水浴 中保溫30min，其間每隔3-4min 輕搖混勻。低溫12000rpm離心5min，將上層水相轉移至新的離心管中。

加入等體積的Tris-酚和氯仿異戊醇，上下顛倒離心管，混合均勻；低溫12000rpm離心5min，將上層水相轉移至新的離心管中。

加入等體積的氯仿異戊醇上下顛倒離心管，混合均勻；低溫12000rpm離心5min，將上層水相轉移至新的離心管中。

加入0.6倍體積的異丙醇，輕輕混勻，置于-20℃沉淀30min。

低溫12000rpm離心5min去上清，加入500μL 70%乙醇洗滌沉淀，常溫12000rpm 2min，去上清，沉淀盡量干燥。

加入適量含有RNase的TE（20μL）溶解沉淀，37℃ 水浴 30min，消化RNA。

取適量基因組DNA樣品，電泳檢測。

四、注意事項

Tris -酚，氯仿和β-巰基乙醇均為有毒試劑，使用時小心，切勿接觸皮膚。

實驗材料要新鮮。

液氮研磨要充分，研磨過程中可補充液氮繼續研磨。