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石蠟切片的蘇木精-伊紅HE染色詳解
關鍵詞： 石蠟 切片來源： 互聯網
| 蘇木精-伊紅染色方法，簡稱HE染色方法，是生物學和醫學的細胞與組織學最廣泛應用的染色方法。在病理學實驗室中稱為常規染色方法。病理細胞和組織學的診斷，教學和研究都是用HE染色方法觀察正常和病變組織的形態結構。因此病理學工作者必需學習和掌握這種染色方法。 （一）HE染色的基本原理 1．細胞核染色的原理 細胞核內的染色質主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的雙螺旋結構中，兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵或氫鍵結合而染色。蘇木精在堿性染料中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。 2．細胞漿染色的原理 細胞漿內主要成分是蛋白質，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質的氨基正電荷（陽離子）結合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。伊紅是細胞漿的良好染料。 隨著科學技術快速發展和電子計算機的廣泛應用，染色自動儀器的出現，許多實驗室已用全自動染色機代替人工染色。 （二）人工操作蘇木精伊紅染色方法 1．染色步驟 二甲苯I脫蠟10min. 二甲苯II脫蠟5min。 無水乙醇洗去二甲苯1min×2次。 95%酒精1min。 90%酒精1min。 85%酒精1min。 自來水洗2min。 蘇木精染色1min至5min。 自來水洗1min。 1%鹽酸酒精分化20s。 自來水洗1min。 稀氨水（1%）反藍30s。自來水洗或蒸餾水洗1min。 伊紅染色20s至5min。 自來水洗30s。 85%酒精脫水20s。 90%酒精30s。 95%I酒精1min。 95%II酒精1min。 無水乙醇I 2min。 無水乙醇II 2min。 二甲苯I 2min。 二甲苯II 2min。 二甲苯III 2min。 中性樹膠或加拿大樹膠封片。 2．染色結果 細胞核呈藍色，細胞漿、肌肉、結締組織、紅細胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染成藍色或紫藍色。 （五）染色液的配制 1．蘇木精（素） 蘇木精是一種純天然染料，是從蘇木素樹提煉出來的，蘇木樹主產墨西哥的坎偑切，蘇木精的染色性能差，經過一百多年精心加工配制，現用的蘇木精配方，染色性能好，保持時間長，是世界上唯一的常規細胞核染料， 2．蘇木精的配制 蘇木精的配方很多，可根據不同需要選用，Harris配方最常用。 （1）Harris蘇木精的配制 蘇木精1g 硫酸鋁鉀15g 無水乙醇10ml 蒸餾水200ml 先用蒸餾水加熱溶解硫酸鋁鉀，用無水乙醇溶解蘇木精再倒入已溶解的硫酸鋁鉀蒸餾水中，煮沸1min后，稍冷卻，慢慢加入紅色氧化汞0.5g，繼續加熱至染液變為紫紅色，用紗布蓋瓶口，用前濾紙過濾后每100ml加冰醋酸5ml。 （2）Mayer蘇木精改良配法 A液 蘇木精2g 無水乙醇40ml B液 硫酸鋁鉀100g 蒸餾水600ml 稍加熱使硫酸鋁鉀在水中溶解，將蘇木精溶于酒精中，再將A液與B液混合煮沸2min。用蒸餾水補足600ml，加入400mg碘酸鈉充分混勻，蘇木精染液呈紫紅色。 （3）Gill改良蘇木精染液的配制 蘇木精2g 無水乙醇250ml 硫酸鋁鉀17g 蒸餾水750ml 碘酸鈉0.2g 冰醋酸20ml 先將蘇木精溶于無水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水中。兩液溶解后將其混合，加入碘酸鈉待蘇木精氧化成紫紅色，再加入冰醋酸。 3．伊紅溶液的配制 （1）水溶性伊紅 伊紅Y0.5－1g 蒸餾水100ml 先將水溶性伊紅加入蒸餾水中，用玻璃棒將伊紅攪起泡沫后過濾，每100ml加冰醋酸1滴。 （2）乙醇性伊紅液的配制 伊紅Y 0.5～1g 90%酒精100ml 先將伊紅溶于酒精中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸1滴。用乙醇性伊紅液染細胞漿后不可經水洗直接用85%酒精脫水。 4．鹽酸酒精分化液的配制 濃鹽酸0.5～1ml 75%酒精99ml 此液用一段時間后需要延長或更換液體，新液分化時間要短。 (責任編輯：大漢昆侖王) |
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