常用試劑盒：BCA Protein Assay Kit

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在蛋白質定量試驗中，最常用的方法是BCA法蛋白定量 。那么為什么我們要選擇用BCA法?而且常常使用到BCA蛋白定量試劑盒（BCA Protein Assay Kit）。因為BCA法蛋白定量具有很多優點，如1.實驗操作十分簡單方便;2.實驗耗時短，快速;3.試劑靈敏度高，實驗結果準確;4.所用的試劑穩定性好，而且經濟實用，抗干擾能力強等。

實驗原理：

BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量：在堿性環境下蛋白質與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu1+(biuret reaction)。BCA與Cu1+結合形成穩定的紫藍色復合物，在562 nM處有高的光吸收值并與蛋白質濃度成正比，據此可測定蛋白質濃度。

產品特點

1.步驟簡單，45分鐘內完成測定，比經典的Lowry法快4倍而且更加方便。

2.靈敏度高，檢測濃度下限達到25μg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5μg，待測樣品體積為1-20μl 。

3.BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學物質的影響，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。

4.在20-2000μg/ml濃度范圍內有良好的線性關系。

5. 檢測不同蛋白質分子 的變異系數遠小于考馬斯亮藍法蛋白定量。

實驗步驟：

1. 先將solutionA 搖晃混勻，根據樣品數量，按50體積solution A加1體積solutionB試劑(50:1)配制成BCA工作液，充分混勻。BCA工作液在24小時內穩定。

2.稀釋標準品：完全溶解蛋白質標準品(5mg/mlBSA,-20℃保存)取10微升用PBS 稀釋至100微升(樣品一般可用PBS稀釋)，使終濃度為 0.5mg/ml。

將稀釋后的標準品(0.5mg/ml)按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升分別加到96孔板的蛋白標準品孔中，加標準品稀釋液補足到20微升。

3.加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中，加標準品稀釋液不足道20ul。

即：將蛋白質樣品作適當稀釋(最好多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋。

4.在 各孔中加入200微升BCA工作液，這時使用加樣槍輕柔吹打，將其中液體混勻，這時請注意，盡量小一點力氣輕柔一點，不要弄出很多氣泡，這樣會影響讀數)，然后再37℃室內放置30-60min。將液體冷卻至室溫，在酶標儀上測定A562nm，或540-590nm之間的波長的吸光值，最后可根據標準曲線計算出蛋白質的濃度，為樣品蛋白質定量。