Bradford法檢測蛋白濃度專題

一、藥品的配制步驟

(一)、實驗準備：

1、 準備所需的藥品和玻璃儀器。

2、 洗滌。(怎樣洗滌算干凈?)

(二)、計算：

1、百分比濃度計算：

1)、G/V比

例如配1% NaCl，稱1g NaCl溶于100ml 水。

2)、V/V比：

例如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X, X=75ml。取75ml無水乙醇，加25ml蒸餾水。

乙醇：乙醚：丙酮=2：1：2配500ml，各取200 ml，100 ml，200 ml混合。

3)G/V比：用的較少，如計算灰分中某種元素如Fe的含量。

2、摩爾濃度計算：注：藥品的分子 量一般在標簽中注明。

1)、0.1M或0.1mol/L NaCl配100ml。

M=質量/體積(L)稱取NaCl0.1×0.1×40=0.4g 摩爾數=G(g)/摩爾質量

2)、0.1mMNaCl配100ml

mM=毫摩爾數/體積(L) 稱取NaCl0.1×0.1×40=0.4g

毫摩爾數=G(mg)/摩爾質量

3)、0.1uNaCl配100ml

mM=微摩爾數/體積(L) 稱取NaCl0.1×0.1×40=0.4mg

微摩爾數=G(ug)/摩爾質量 稱取NaCl0.1×0.1×40=0.4ug

3、 混合溶液配制的計算：

如配3uMEDTA ，2.25mM NBT以及60uM 溶液100ml，用50mM磷酸緩沖液配制。

注意：1、分別標定體積計算

2、分別配制再混合，但總體積不能 為100ml

(三)、標量：

1、根據需要選擇不同量程的天平根據要求去不同精度的測量器，如量筒或移液管。

2、電子分析天平的使用。

(四)、溶解：

1、根據藥品配置要求選擇溶劑。蒸餾水，雙蒸水，無離子水等。

2、只能用燒杯溶解。注意加入溶劑只能加入總體積的2/3左右，剩余溶劑洗滌燒杯三次左右，直到洗滌干凈。

小常識：藥品標簽中一般標識有藥品的溶解性能和分子 式，可根據分子式和所學的常識判斷藥品的結構和性質特點(包括溶解性質)。

如酸堿兩性物質的配制(AA、蛋白質、核苷酸 等)如果溶解性能不好可以用稀酸或稀堿促進溶解，但pH應在被要求的范圍內。

3、加熱促進溶解，但注意應在配制的范圍內有的藥品還需水溶加熱較好。如:配0.1%的淀粉，水裕加熱(溫度在80-90。C)，過量會糊化。

(五)、定容：

1、用容量瓶定容;

2、用玻璃棒引流或用小漏斗;

3、用溶劑加入到接近刻度，然后用滴管加入到刻度。要求刻度與液體凹面相切為止(眼睛可視);

4、上下窯洞容量瓶幾次，混合均勻即可。(注意不再定容了，防止溶液漏掉。)

(六)、裝入試劑瓶，貼上標簽。

標簽應注明以下內容：藥品濃度、名稱、配制人、配制日期等。

(七)、清理實驗場所。

二、磷酸緩沖液 的配制。

(一)、配制0.2mol/L即0.2M pH=6.8的磷酸緩沖液。用磷酸氫二鈉—磷酸二氫鈉做緩沖液。

選用藥品：Na2HPO4·12H2O(堿)和NaH2PO4·12H2O(酸)配緩沖液100ml。書中說明。

(二)、計算 ：

1、注：書中有注明配置的量。

2、計算：Na2HPO4·12H2O稱取71.64×0.1=7.164g

NaH2PO4·12H2O稱取 31.21×0.1=3.121g

3、含有不同結晶水的換算。

書中配1/15mol/L的緩沖液配1L，書中用Na2HPO4·2H2O需要11.87g/L但用Na2HPO4·12H2O需多少g?

11.87=(178/358)×X，X=23.87g。

(三)、分別配制緩沖液各100ml(根據需要確定配制的量)。

即：0.2M Na2HPO4·2H2O和NaH2PO4·2H2O100ml。

(四)、按書中的量配制取量再混合。

如：pH=6.8，分別去緩沖對49ml和51ml。

(五)、用pH試紙ceni索賠的緩沖液的pH值，檢測配置是否準確。

(六)如配50mM pH =6.8的緩沖液100ml ，以你配制的母液稀釋即可。

計算：50×0.1=0.2×1000×X (L);X =0.025L;

取0.2M pH=7.2的緩沖液25ml，用蒸餾水定容至100ml即可。