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    瓊脂糖凝膠電泳常見問題與解決辦法

    關鍵詞: 瓊脂糖凝膠電泳來源: 互聯網

    一、凝膠制備

    1. 微波爐溶解瓊脂糖時,膠液沸騰沖溢出三角錐瓶微波爐加熱時膠液可能發生劇烈沸騰,

    (1)總液體量不宜超過三角錐瓶的50%容量。

    (2)2%以上膠液設置中火加熱。

    (3)膠液劇烈沸騰時,停止加熱,移開三角錐瓶,請戴上防熱手套,小心搖動三角錐瓶,然后再次加熱,膠液沸騰直至膠液清澈,保證瓊脂糖完全溶解。

    2. 瓊脂糖電泳圖像背景模糊不清:瓊脂糖沒有完全溶解會造成電泳圖像背景模糊不清。完全溶解的瓊脂糖膠液清澈,三角錐瓶內壁應沒有粘附瓊脂糖顆粒。

    3.加熱后水分蒸發,如需要應加入熱的蒸餾水,補足到原來的重量,搖勻。

    二、電泳

    1. DNA條帶模糊,拖尾。

    (1)DNA降解。避免核酸酶污染。

    (2)DNA上樣量過多。減少凝膠中DNA上樣量。

    (3)電泳緩沖液陳舊:電泳緩沖液多次使用后,離子強度降低,pH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果。建議經常更換電泳緩沖液。

    (4)電泳條件不合適。電泳時電壓不應超過20 V/cm,溫度<30℃,巨大DNA鏈,溫度應<15℃,核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。

    (5)DNA樣含鹽過高。泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽。

    (6)有蛋白污染。電泳前抽提去除蛋白。

    (7)DNA變性。電泳前勿加熱,用20 mM NaCl緩沖液稀釋DNA。

    2. DNA條帶淡弱或無DNA帶。

    (1)DNA的上樣量不夠:增加DNA的上樣量。

    (2)DNA降解:避免DNA的核酸酶污染。

    (3)DNA走出凝膠:縮短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度。

    (4)分子大小相近的DNA帶不易分辨。增加電泳時間,使用正確的凝膠濃度。

    (5)DNA變性:電泳前請勿高溫加熱DNA鏈,用20 mM NaCl Buffer稀釋DNA。

    (6)DNA鏈巨大,常規凝膠電泳不合適。在脈沖凝膠電泳上分析。

    3. DNAMARKER條帶扭曲。

    (1)配制凝膠的緩沖液和電泳緩沖液不是同時配制的。使用同時配制的緩沖液。電泳時緩沖液高過液面1~2 mm即可。

    (2)電泳時電壓過高。可以在電泳前15分鐘用較低電壓(3 V/cm),等條帶出孔后,再調電壓。

    (3)盡量慢慢加樣,等樣品自然沉降后再加電壓。

    推薦方法

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