目的研究SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）顯示小分子多肽的方法.方法　觀察不同方法處理的樣品，上樣量對電泳結果的影響及對分子量標準（Mr2512～16949）進行直線回歸分析.結果　樣品的不同處理條件未見有差異；在該實驗系統條件下上樣樣品為每孔5～10μg較佳；分子量標準直線回歸系數r=-0.962.結論　樣品處理方便；上樣量少；在160 g?L-1 T，60 g?kg-1 C較低的丙烯酰胺含6 mol?L-1脲的分離膠中能夠顯示Mr為2512的多肽，是一種顯示小分子多肽的較好方法. 　　關鍵詞：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳；肽；蛋白質 　　0　引言 　　20世紀60年代Shapiro建立了SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）方法之后，Weber，Glossmann和Douglas等人進行了多次改進，已顯示出了在分離、鑒定和純化蛋白質方面的優越性，但對于Mr小于10000的蛋白質來說是無能為力的［1］. 20世紀80年代初Sch%26auml;gger等［2］應用脲分離蛋白質復合體亞單位的11種蛋白質，但分離效果不甚理想且重復性較差.之后他們又進行了系統地研究和摸索，能夠分離較大Mr范圍內的蛋白質.隨著生物技術的飛速發展和基因工程藥物的大量涌現，具有高生物活性的小分子多肽的分離、純化和鑒定已顯得尤為突出.我們在進行基因工程藥物的開發研制中，對SDS-PAGE方法進行了多次改進，在較低的丙烯酰胺濃度下取得了理想的結果.此法所需儀器簡單，操作方便，重現性好，時間短，只需微克量的多肽便可顯帶且能迅速估計出其Mr，值得進一步推廣和利用. 　　1　材料和方法 　　1．1　試劑和儀器　SDS、脲、甘油、過硫酸銨均為分析純,陰離子，西安化學試劑廠出品,陽離子聚丙烯酰胺；丙烯酰胺（分析純）為汕頭市光華化學廠產品；N，N′-甲叉雙丙烯酰胺（分析純）為浙江黃巖人民化工廠生產； tris（分析純）為成都試劑廠出品；TEMED為BIO-RAD產品；Tricine(Ultra pure Grade)為Solon Ind產品. BIO-RAD小型垂直式電泳附件模具；FD-201穩壓穩流電泳儀（上海醫用分析儀器廠）. 　　1．2　肽分子質量標準　肽分子質量標準的Mr范圍2512～16949為Pharmacia lKB 公廠產品. 胸腺肽α1是美國加州圣馬刁市賽生藥品公廠產品（商品名“ZADAXIN”），是一乙酰化的多肽，Mr為3108， pI 3.8. 經 Sephadex G-25柱去除所含的甘露醇，然后冷凍干燥，用樣品緩沖液配成所需樣品. 　　1．3　方法 　　1．3．1　電泳貯存液的配制　陽極緩沖液中Tris為0.2 mol?L-1用HCl調pH值至8.9.陰極緩沖液為0.1 mol?L-1 的Tris， 0.1 mol?L-1的Tricine和0.01 g?L-1的SDS溶液，其pH值約為8.25. 膠緩沖液為3.0 mol?L-1的Tris和 0.03 g?L-1的SDS，用HCl調pH值至8.4. 　　稱取48 g丙烯酰胺和1.5 g N，N′-甲叉雙丙烯酰胺溶于100 mL純水中，溶解混勻后經4號濾紙過濾即得到495 g?L-1 T，30 g?kg-1 C的貯存液；稱取46.5 g丙烯酰胺和3.0 g N，N′-甲叉雙丙烯酰胺溶于100 mL純水中，同樣得到495 g?L-1 T，60 g?kg-1 C的貯存液（T代表丙烯酰胺的總濃度，C代表交聯度）. 　　1．3.2　膠的制備　與一般SDS-PAGE電泳相似［3］，按Tab1給出的數據分別配制分離膠、間隙膠和濃縮膠，依次灌膠. ,陽離子; 1．3.3　樣品緩沖液的制備及樣品的處理　蛋白質樣品與上樣緩沖液（4 g?L-1 SDS，120 g?L-1甘油，50 mol?L-1 tris，20 mL?L-1巰基乙醇含0.1 g?L-1溴酚藍，pH6.8）混合均勻，分別按40 ℃孵育30 min；60 ℃孵育10 min和煮沸2 min處理. 　　1．3．4　電泳條件　內槽裝陰極緩沖液、外槽用陽極緩沖液恒壓電泳，先40 v約1 h，當樣品進入分離膠時，電壓升至60 V約2 h. 　　1．3．5　染色、脫色和膠的保存　電泳完畢時膠置于染色液［2.5 g?L-1考馬斯亮藍R-250的乙醇（V）∶冰乙酸（V）∶水（V）為9∶2∶9］中振蕩染色1.5～2 h，轉至脫色液（400 mL?L-1的乙醇，40 mL?L-1的冰乙酸）中擴散脫色，直到背景清晰.膠的保存與一般SDS-PAGE類同［3］. 　　2　結果 　　2．1　不同處理的樣品對SDS-PAGE的影響　多肽樣品經上述3種不同處理，經SDS-PAGE后，分子質量蛋白標準（Mr2512～16949）沒有電泳差異，均能較清晰地顯示6條帶（Fig 1）.分子質量蛋白標準分別在每孔上不同量的蛋白質（Fig 2），當上樣量為1μg時，分子質量蛋白標準僅能顯示其中的5條帶.當上樣量達到5～10 μg時，Mr 2512的肽帶明顯可見. 　　2．2　分子量標準蛋白回歸方程及對低分子量標準品的分析　應用160 g?L-1T，60 g?kg-1C含6 mol?L-1脲的丙烯酰胺凝膠能夠較好地顯示標準蛋白的6條帶（Fig1）. 對其Mr對數（lgMr）和在分離膠中遷移的距離（&mu,丙烯酰胺;）進行直線回歸分析，回歸方程為 =-0.0378x + 4.5512，相關系數r = -0.962，從曲線查及胸腺肽α1單體的Mr為3135（其理論Mr為3108）.