同位素標記自動檢測藥物代謝物 優于RAM方法

概覽：

• 根據¹⁴C標記的同位素譜圖自動檢測藥物代謝物
• 新運算法則校正質譜的質量數和峰形，且自動計算¹²C/¹⁴C比率
• 三個研究實例顯示，這種方式相對于在線放射性監測（RAM）具有更好的選擇性和靈敏度。

      在藥物代謝研究中，利用放射性同位素或穩定同位素標記藥物分子，是研究復雜生物基質中母藥及其主要代謝物的有效方式。同位素標記藥物和代謝物常常與它們非標記配位物共存，產生唯一的同位素輪廓圖。這個唯一的同位素輪廓圖能夠利用LC/MS 進行代謝物識別，而在LC/MS 生物樣品分析中，找到這些代謝物峰需要很大的工作量。這里報道一個基于峰形校正的新方法，可以自動過濾篩選出具有唯一同位素輪廓的代謝物。

實驗：

      ¹⁴C標記和非標記的測試樣，¹²C/¹⁴C比例為50:50、65:35和75:25，濃度分別為1和10 uM在人肝細胞和肝臟微粒體中進行培養。培養后，培養混合物利用1或3倍體積的冰冷甲醇提取，甲醇提取物用于放射物檢測和LC/MS分析，全部LC/MS數據利用ABI/Sciex API 4000 Qtrap進行采集并利用MassWorks軟件分析。

結果與討論：

    作為含有¹²C和¹⁴C分子的混合物，¹⁴C標記的藥物及其代謝物具有唯一的同位素輪廓。利用新型校正技術，這些輪廓圖能用于自動快速檢測代謝物。

     一個研究實例表明：對比在線放射性監測（RAM），¹²C/¹⁴C同位素輪廓直接提取離子色譜圖（IPDXIC）明顯比RAM具有更高的選擇性和靈敏度，IPDXIC不僅找到RAM中的全部峰，而且也檢測到RAM中沒有發現的峰。

      IPDXIC的高選擇性、高靈敏度檢測進一步表現在低濃度樣品情況下，在實例中，RAM僅僅檢測出一個峰，而相應的IPDXIC檢測出9個代謝物。

      另一個重要特點是，這種方式完全自動操作，不論¹²C/¹⁴C比例多少，一個校正，即可得到不同比例（50:50、65:35和75:25）的有效IPDXIC結果。


結論：

• IPDXIC數據處理完全自動、容易操作
• IPDXIC相對于在線RAM，檢測¹⁴C標記的代謝物具有更高的靈敏度
• 利用唯一的校正運算法則，不需要指定¹²C/¹⁴C比例就可以發現同位素輪廓圖
• 該方法對于其它放射性同位素標記的代謝物、穩定同位素或含有Br和Cl的代謝識別也是有效的。