CRO方案：四極桿和TOF液質聯用上進行合成藥物中的雜質識別

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Mass Works 技 術 專 題

本文利用了Agilent LC-MSD結合massworks對合成藥物中的雜質進行了準確的識別

儀器：
Agilent LC-MSD，Agilent LC-TOF
MassWorks軟件

分析方法：

1）雜質提取物與內標物（C₁₂H₁₃N₃，m/z 199）混合，利用Agilent LC-MSD進行色譜分離和質譜檢測，Chemstation在Profile模式下進行數據采集，MassWorks對采集數據進行校正、分析雜質（m/z 241）的分子式。

2）雜質提取物利用Agilent LC-TOF進行色譜分離和質譜檢測，MassHunter在Profile模式下進行數據采集，MassWorks對采集數據進行校正、分析雜質（m/z 241）的分子式。

結果與討論：


      利用內標物（C₁₂H₁₃N₃，m/z 199）作為MassWorks的校正標樣，對雜質（m/z 241）的平均質譜峰進行校正，并利用MassWorks內置的CLIPS（校正的線性同位素輪廓搜索）進行分子式檢索，得到候選分子式如表1所示。

      在搜索結果中排名第一位的C₁₃H₁₆N₅（C₁₃H₁₅N₅的加氫離子）校正后的質量精度雖然只有18 mDa，但它具有99.75%的最高譜圖準確度。

      圖2為雜質校正后的輪廓質譜圖與排在第一位的C₁₃H₁₆N₅理論質譜圖的疊加比較結果，可見具有很好的匹配結果。


      MassWorks可以不需校準物校正，直接對TOF等高分辨質譜數據進行分析。表2為MassWorks校正后，利用sCLIPS（自校正線性譜圖同位素輪廓搜索）搜索得到待選分子式列表。可見利用MassWorks校正后，TOF得到了與LC-MSD相似的結果。雖然具有約8 ppm的質量精度（C₁₂H₂₀O₄N 具有更小的2ppm的質量精度），但C₁₃H₁₆N₅具有最高的譜圖準確度，但其具有最高的譜圖準確度，所以排在待選列表的第一位。

      雜質隨后利用核磁等分析工具進一步分析后，確認為C₁₃H₁₆N₅，與MassWorks的分析結果完全吻合，所以，TOF儀器并不能給出正確的分析結果（排序第一的是C₁₂H₂₀O₄N ），質量精度不能提供可靠的識別工具，而譜圖準確度相對質量精度是更可靠的分子識別手段。


結論：

• 利用MassWorks在單位質量分辨的四極桿LC-MS實現了合成藥物中的雜質識別
• 不要標準物校正，MassWorks可以對高分辨的TOF儀器得到的數據進行校正，進行分子式識別
• TOF儀器的高質量精度，并不能實現分子式的正確識別
• TOF儀器的高質量精度，結合MassWorks的同位素輪廓校正技術，利用譜圖準確度實現了未知物的正確識別。