急性腎損傷NGAL ELISA Kit

上一篇 / 下一篇 2014-11-28 12:58:36

急性腎損傷NGAL ELISA Kit

中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白快速檢測酶免試劑盒，可用于人尿液、血漿和血清。急性腎功能衰竭（ARF）是心臟手術、腎毒性、腎移植常見的并發癥。中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL），也稱為Lipocalin-2（脂質運載蛋白-2），是脂質運載蛋白家族的一個新成員，它是腎功能損傷早期的生物標志物。NGAL不僅僅存在于嗜中性粒細胞中，也會出現在特定的上皮細胞內，例如發生缺血性和毒性腎損傷過程中，腎小管上皮細胞中的NGAL將顯著增加，在開始的兩個小時內，尿液和血液中NGAL水平將顯著增加，因此NGAL是早期急性腎損傷的敏感標志物。

【臨床意思】

急性腎功能損傷過程中NGAL 水平偏高，預后將發展成為急性腎功能衰竭。NGAL水平偏高通常出以下情況：心血管手術患者、病危人員、膿血性或出血性休克、腎移植、靜脈X射線造影劑的反應和腎毒性治療反映。50%以上的病人都會出現一定程度的急性腎功能衰竭，通常大病后期出現使得死亡率大大增加。急性腎衰竭的預后一直沒有得到改善，在今后的四十年里將引起顯著關注。通用的診斷方法如測定血清肌酐或者半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(Cystatin C)都只能在腎功能退化后檢測出，那只能損傷后一天甚者幾天內檢測。用NGAL蛋白快速檢測酶免試劑盒，醫生可在損傷幾小時內對急性腎功能障礙做適當的處理。

Bioporto Diadnostics的研究表明，健康志愿者尿液中NGAL含量檢測結果分布0.7-9.8ng/ml，平均值為5.3ng/ml，。而血漿中的含量檢測結果為37-106ng/ml，平均值為63ng/ml。當腎損傷后，NGAL水平將迅速陡增。隨機檢測重病患者，尿液NGAL的濃度為110ng/ml 到40000ng/ml不等。而他們EDTA抗凝血漿檢測結果為25ng/ml到3491ng/ml。根據急性腎衰竭患者檢測的90%陽性預測值判斷，尿液中NGAL的陽性判斷值為350ng/ml，而血漿檢測的陽性判斷值為400ng/ml.

【試劑盒特異性】

在標準 實驗室內，使用常規的ELISA設備即可在4個小時內得到檢測結果。所有的組分物質需4℃保存，孵育操作室溫即可。該試劑盒提供即用型的標準品、試劑和包被好的板條，可節省操作的時間，操作簡單，分析快捷，且操作可重復性好。

操作簡單，分析快捷

可檢測尿液，血漿和血清

可重復性操作好，使用方便

即用的標準品和稀釋液

包被好的ELISA板室溫孵育

所有的組分可在四度保存

僅需要常規的ELISA設備即可。

【試劑盒組成】

包被的可拆式12*8酶標板---------------------------------------------96孔

5×樣品稀釋濃縮液----------------------------------------------------1*60ml

NGAL標準品1-6，每個瓶子上標簽上均標有鑒定的準確濃度---------------6*1ml

25×清洗濃縮液-------------------------------------------------------1*30ml

HRP標記的NGAL抗體-----------------------------------------------1*6ml

TMB緩沖液--------------------------------------------------------- 1*12ml

終止液--------------------------------------------------------------1*16ml

【實驗步驟】

試劑準備

1. NGAL一抗包被的ELISA板和反映試劑，恢復室溫（20-25度）后使用，試劑注意搖勻，如果有少量沉淀，請低速離心。

2. 對照品放置于2-8度備用，一般國際上實驗室檢測時對照品一般是做復孔，準備12個孔。

3. 清洗液的準備：用雙蒸水將清洗液進行25倍進行稀釋，即30ml→750ml，混勻之后2-8度備用。

4. 樣本稀釋液：將5倍的樣品稀釋液60ml用雙蒸水將清洗液進行25倍進行稀釋，即60ml→300ml，混勻之后2-8度備用。如果不是一個ELISA板都一次性使用，可取少量稀釋，加4倍體積的雙蒸水即可。

5. NGAL標準蛋白，HRP-NGAL，TMB和終止液不需要稀釋。

樣品的準備：

標準曲線的范圍為0.2-20ng/ml，血漿和血清的檢測范圍為100-500ng/ml，尿液的范圍為50-500ng/ml，所以一般血清和血漿做1：100稀釋，而尿液樣本的稀釋度1：50，即血清和血漿可以10ul加990ul的樣本稀釋液，而尿液樣本的加液為490ul，倒置混勻或蝸旋器混勻均可。樣品的檢驗靈敏度必須在最低值和最高值之間。樣品的稀釋度不得低于1：25。

操作流程：

1. 熟悉實驗操作protocol，準備酶標儀450nm，650nm（非必須）或620nm（非必須），空白對照請加50ul樣本稀釋液。

2. 用稀釋板稀釋樣本， 1：100的血清和血漿稀釋，1：50的尿液稀釋，混勻

3. NGAL標準蛋白，每孔50ul，至于稀釋板中

4. HRP-NGAL：每個反應孔加樣50ul，用多道移液器將稀釋板中的樣本和標準蛋白50ul移至反應板中。

5. 酶標板加蓋后，室溫孵育30min，200/minute搖勻。

6. 甩盡ELISA板內溶液，用清洗液清洗三次，300ul每孔，甩干后在紙上拍干，最后一次清洗請浸泡1min。充分的清洗是為了最后的顯色。手動加樣，比較溫和，有時容易引起高背景，可以用多道移液器清洗，也可以使用洗板機進行清洗。

7. 用多道移液器加TMB顯色液100ul至每個反應孔，開始加樣，請定時15min，加樣結束后蔽光室溫孵育15min。

8. 加100ul終止液結束反應，輕輕搖勻20sec，避免溢出，在30min內讀數。

9. 酶標儀450nm吸光度讀取OD值，參比波長650 nm或620nm，如果沒有，可以參考空白對照值。

相關產品：

貨號	品名	種屬	樣本	檢出限
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