減少pcr產物中引物二聚體的方法

　　減少引物二聚體的方法

　　1. 從引物自身著手，重新設計引物，這是最根本解決這一問題的辦法;

　　2. 可能模板有問題;

　　3. 模板濃度過小，適當加大模板量;

　　4. Taq酶，引物，Mg2+濃度可能過高，可降低它們的濃度;

　　5. 取你所要加的上下游引物混合后，在100攝氏度下的沸水中煮5分鐘，然后迅速拿出至于冰塊之上瞬時冷卻，這時再加入反應體系當中，引物二聚體就會消失的;

　　6. 所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增強特異性;

　　7. PCR反應體系的配制在冰上進行，最后加TAq酶，PCR結束后，產物勿放置在室溫下過長時間，有人認為室溫下有些TAQ酶會將多余的引物合成為二聚體。

　　8. 增加循環數;

　　9. 降低退火溫度后有條帶，則應逐漸提高溫度，若提高溫度的同時產物量減少，則考慮增加鎂離子濃度(根據擴增片斷長度而定，片段長則相應鎂離子濃度應該高一些);

　　10. 若降低退火溫度，發現還是只有引物二聚體，而且鎂離子的濃度在 20-25mmol/l沒有區別，則考慮Buffer等試劑沒有完全融解、混勻，導致吸取的試劑濃度不對。

　　11. 以上次的pcr產物作模板二次pcr，可以提高引物與模板的特異性，減少引物二聚體，如果兩次時間間隔短的話，可以把原產物稀釋100-1000倍，如果間隔較長可以稀釋50-100倍