定量分析protein A雜質丨艾美捷Protein A殘留檢測試劑盒方案

艾美捷Protein A殘留檢測試劑盒是用來定量分析以抗體純化介質protein A雜質的試劑盒。

背景資料：

在單克隆抗體藥物的純化過程中，以蛋白A（Protein A）為基礎的親合層析是廣泛應用的純化方法之一，單克隆抗體可以有效的在此步驟中得到純化。蛋白A 的最初來源是細菌（Staphylococcus aureus）細胞壁中的一個蛋白質，研究表明蛋白A 可能對人體有潛在的危害，它的生物學作用包括刺激人體多種細胞素（IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4）的釋放。由于在蛋白A 親合層析柱使用過程中會有微量的蛋白A 從層析柱上脫落下來，因此用靈敏的方法來確證單克隆抗體藥物中蛋白A 的殘留處于一個較低的和穩定的水平是單克隆抗體藥物的質量標準之一。

蛋白A (Protein A) 酶聯檢測試劑盒是用來定量分析生物藥物中蛋白A雜質的試劑盒。首先，用不同濃度的蛋白A標準蛋白制作一條標準曲線，然后再根據標準曲線來分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。

具體方法為：先將蛋白A標準蛋白或者待測樣品適當稀釋后加入已包被好抗蛋白A抗體的96孔平板中。經過1.5小時的保溫，蛋白A與已經固定在平板上的抗體結合形成抗原－抗體復合物。此復合物被隨后加入的生物素標記的抗蛋白A的抗體結合并進一步形成更高級的復合物，反應45分鐘后洗去未結合的物質。再加入鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復合物（Streptavidin-HRP Conjugate），靜置30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標記的抗體相結合，從而使鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復合物連接到平板上。接下來沖洗掉未結合的物質，加入TMB底物。固相上的酶催化底物產生顏色反應，待顏色反應一段時間后，終止反應。用酶標儀在450 nm波長下測定其結果，此結果能間接地反應結合到平板上的蛋白A數量的多少。根據蛋白A標準曲線定量分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。

艾美捷Protein A殘留檢測試劑盒：

Protein A ELISA kit

編號：ADI-900-057

規格：96 Wells（可做37個樣本！）

樣本類型：含有天然或者重組Protein A的中性緩沖液（無物種限制）

檢測方法：比色法，450 nm

組分：Microtiter plate, Conjugate, Antibody, Assay buffer 13, Wash buffer concentrate,Standard, TMB Substrate, Stop solution 2

保存條件：藍冰運輸；收到貨后4℃保存（切勿冰凍）

僅用于科研實驗.

艾美捷Protein A殘留檢測技術信息說明：

對來自金黃色葡萄球菌(M)的天然蛋白 A、來自大腸桿菌(R) 的重組蛋白 A、來自大腸桿菌(G)的重組半胱氨酸蛋白 A和重組耐堿蛋白 A的不同蛋白 A 構建體的檢測識別對來自大腸桿菌(S) 的變體進行了測試，所得濃度從試劑盒標準曲線中插值并顯示在所提供的圖中。

圖：煮沸后不同蛋白 A 構建體的測定識別。從試劑盒標準曲線內插得到的濃度。通過將觀察到的濃度除以預期濃度來計算回收率百分比。A：來自金黃色葡萄球菌(Millipore)的天然蛋白A，n=9；B：來自大腸桿菌(Repligen)的重組蛋白A，n=9；C：來自大腸桿菌(GE)的重組半胱氨酸蛋白A ，n=12；D：來自大腸桿菌的重組抗堿性蛋白 A 變體（來自 GE 的 MabSelet SuRe），n = 12；圖形數據代表統計平均值 +/- 1 標準偏差。

來源：https://www.amyjet.com/products/ADI-900-057.shtml