附參考資料丨PsbA丨D1 protein of PSII研究

由于PsbA（D1）蛋白質的生物學特性，在樣品中可以觀察到許多降解產物，并且在使用抗PsbA抗體時可以觀察到這些降解產物，包括表觀分子量為24kDa和16kDa的產物。D1降解是一組復雜的事件，觀察到的產物可能受到提取程序和收獲前細胞生理學的影響。D1和細胞色素b559之間可能發生交聯，使蛋白質在凝膠中的位置升高。在藍藻（PCC7942）中，通過將抗體與PsbA游離肽預孵育，三條不同的條帶競爭，表明所有條帶確實是PsbA及其前體或分解產物。還對菠菜和衣藻進行了競爭分析，確認了PsbA條帶的身份。

抗PsbA抗體不會檢測D2蛋白，因為用于產生PsbA抗體的肽與D2序列沒有同源性。艾美捷 PsbA|D1 protein of PSII應用實例：

不同數量的PsbA蛋白質標準品（AS01 016S）250 fmol（1）、125 fmol（2）、62.5 fmol（3）、31.25 fmol（4）、15.625 fmol（5）和2μg總蛋白，從使用蛋白質提取緩沖液PEB（AS08 300）提取的Med4（6,7）中提取。樣品用1X樣品緩沖液（NuPAGE LDS樣品緩沖液（Invitrogen））稀釋，補充50 mM DTT，在70°C下加熱5分鐘，并在裝載前保持在冰上。蛋白質樣品在4-12%的Bolt Plus凝膠、LDS-PAGE上分離，并使用罐轉移法在PVDF上吸附70分鐘。在室溫下攪拌2%封閉劑或5%非脂肪乳（溶解于20 mM Tris、137 mM氯化鈉pH 7.6和0.1%（v/v）吐溫-20（TBS-T）中）1小時后，立即封閉印跡。在室溫下攪拌，以1:10000的稀釋度（在封閉試劑中）在一級抗體中培養印跡1h。傾析抗體溶液，短暫沖洗印跡兩次，然后在室溫下攪拌，用TBS-T清洗1x15分鐘和3x5分鐘。將印跡在二級抗體（山羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶結合物，推薦二級抗體AS09 602，Agrisera）中培養，在室溫下攪拌，在封閉試劑中稀釋至1:25 000，持續1h。按上述方法清洗污漬。根據制造商的說明，使用化學發光檢測試劑開發印跡。使用CCD成像儀（VersaDoc MP 4000）和Quantity One軟件（Bio-Rad）獲得斑點圖像。曝光時間為30秒。

參考資料：

Selected references Gu et al. (2021) A Lipid Bodies-Associated Galactosyl Hydrolase Is Involved in Triacylglycerol Biosynthesis and Galactolipid Turnover in the Unicellular Green Alga Chlamydomonas reinhardtii

Sharma et al. (2021) Simultaneous knockout of multiple LHCF genes using single sgRNAs and engineering of a high-fidelity Cas9 for precise genome editing in marine algae. Plant Biotechnol J. 2021 Mar 24. doi: 10.1111/pbi.13582. Epub ahead of print. PMID: 33759354.

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Khajuria et al. (2020). Photochemical Efficiency Is Negatively Correlated With the ? 9- Tetrahydrocannabinol Content in Cannabis Sativa L. Plant Physiol Biochem. 2020 Apr 8;151:589-600. doi: 10.1016/j.plaphy.2020.04.003.

Agrisera公司提供的植物領域的抗體涵蓋擬南芥、萊茵衣藻、藍藻、松柏類、硅藻、大豆、大麥、蒺藜苜蓿等等。艾美捷科技是Agrisera的中國代理商，為科研工作者提供優質的PsbA|D1 protein of PSII。