一種新的中心體蛋白質TACP1 與有絲分裂激酶N ek2A 相互作用的研究

[摘　要]　目的: 研究一種新的中心體蛋白TACP1 蛋白與有絲分裂激酶N ek2A 在有絲分裂期的相互作用關系。方法: 在大腸桿菌中表達和純化的N ek2A 3052446蛋白與293T 細胞中表達的TACP1 蛋白, 進行體外pu ll2dow n 實驗; TACP1 和N ek2A 兩種質粒共轉染293T 細胞, 用TACP1 多抗進行免疫共沉淀實驗; Hela 細胞共轉TACP1 和N ek2A , 利用間接免疫熒光的方法在熒光顯微鏡下觀察兩種蛋白的亞細胞定位。結果: TACP1 條帶可以出現在大腸桿菌中表達和純化的N ek2A 3052446泳道中,而對照組中無TACP1 條帶。TACP1 抗體可以將細胞裂解液中的N ek2A 蛋白連同TACP1 蛋白一起沉淀下來, 而對照組免疫前的兔血清則不能將TACP1 或N ek2A 沉淀下來。在Hela 細胞有絲分裂
中期, TACP1 和N ek2A 都呈點狀定位于中心體, 兩者信號疊加后也重合。結論: 中心體蛋白TACP1在體內、體外能與有絲分裂激酶N ek2A 相互作用, 兩者在細胞有絲分裂期都定位于中心體。