小鼠晶體蛋白質組的雙向電泳和質譜鑒定研究

【摘要】　目的　應用雙向電泳和質譜技術研究5 周齡小鼠晶體蛋白質組。方法　提取小鼠晶體總蛋白,進行固相pH梯度( IPG) 等電聚焦雙向電泳,膠體考馬斯亮藍R2250 染色,使用PDQuest 7130 圖像分析軟件分析電泳圖像。選擇主要蛋白點膠上酶解,應用基質輔助激光解析電離飛行時間P飛行時間(MALDI2TOFPTOF) 儀器進行串聯質譜(MSPMS) 鑒定。結果　上樣量為882μg 和190μg 時,分別檢測370 ±41 蛋白點(n = 3) 和57 ±5 個蛋白點(n= 3) 。高上樣量能夠較好地分離晶體低豐度蛋白,如念珠狀纖維結構蛋白BFSP;低上樣量可很好地分離高豐度蛋白—晶體蛋白(包括αA、αB ;βA1～βA4 ;βB1～βB3 ;γA～γF 和γS 等) 。質譜鑒定得到1 種細胞骨架蛋白和16 種高豐度晶體蛋白。結論　雙向電泳和質譜技術有效考察了晶體總蛋白質,為分析白內障形成過程中蛋白質的表達改變提供了新的方法和途徑。