疏水型色譜餅對人血清蛋白質組學樣品的快速分離與制備

摘要:建立了疏水型色譜餅(10 mm ×20 mm i. d. )與反相色譜(RPLC )離線二維色譜快速分離制備人血清蛋白質組學樣品,并用基體輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALD I2TO F MS)進行檢測的方法。以4種標準蛋白質的稀溶液為模型進行分離富集,得到細胞色素c (Cyt2c)與肌紅蛋白(M yo )的檢出限均為1 pm o l /μL,溶菌酶(Lys )和胰島素( Ins )的檢出限為011 pm o l /μL。將此方法用于人血清蛋白質組學樣品的分離與制備,隨著血清處理量的增大,質譜可檢出的組分數目與信號強度均增加,當血清處理量達到110 mL 時,可檢出低豐度蛋白質或多肽285個(相對分子質量均在15 000以下) 。研究中將1μg Cyt2c加入到015 mL 血清中, 用上述方法在分離富集低豐度Cyt2c上取得了很好的效果。結果表明,采用疏水型色譜餅與反相色譜聯用技術不僅可對血清樣品中低豐度蛋白
質進行有效的分離和富集,而且一次樣品的處理量大,可顯著提高低豐度蛋白質的分析、檢測水平。