人類扭轉蛋白A的基因克隆、表達與蛋白質純化( I)———DYT1基因克隆與原核表達

上一篇 / 下一篇 2008-12-31 21:01:28/ 個人分類：蛋白質

文件版本: V1.0
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摘　要: 通過基因工程方法,用大腸桿菌原核表達系統表達人扭轉蛋白A. 從該蛋白編碼序列中設計引物,以人肝cDNA文庫作模板擴增到編碼該蛋白的基因片段. 將所得片段與pMDl8- T載體連接,轉化到JMl09大腸桿菌中,從轉化平板上挑出菌落,用堿裂解法提取質粒,通過PCR和酶切分析,篩選到陽性克隆,測序結果與文獻報道結果一致. 提取質粒,用BamH I和Xho I酶切,回收目的片段,分別克隆到原核表達載體pET28a ( + )和pGEX-6P- 1中,轉化JMl09受體菌,從JMl09受體菌中提出質粒,再轉化到BL21 (DE3)菌中,篩選出陽性克隆,構建了人扭轉蛋白A原核表達載體. IPTG誘導該工程菌,培養并離心收集. SDS- PAGE結果表明該蛋白在兩種載體中均得到了高效表達.

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