羥基喜樹堿誘導肝癌細胞凋亡前后細胞核蛋白質組變化的定量分析

摘要 對羥基喜樹堿誘導肝癌細胞凋亡前后的細胞核蛋白質組進行定量研究, 獲得凋亡前后細胞核蛋白質組中差異蛋白表達量相對變化的信息, 為在亞細胞定量蛋白質組水平上深入探討羥基喜樹堿的作用機理提供實驗依據。分離提取羥基喜樹堿誘導肝癌細胞凋亡前后的細胞核并鑒定其純度, 用含穩定同位素的化學試劑c- ICAT 標記細胞凋亡前后的細胞核蛋白, 對細胞核標記蛋白進行消化和純化, 利用基于多維色譜- 線性離子阱/ 靜電場軌道阱質譜聯用技術的鳥槍( Shotgun) 法策略及c- ICAT 定量策略分析鑒定蛋白質, 獲得同一種肝癌細胞核蛋白質在凋亡前后細胞中的表達量變化比值。分析鑒定了在細胞凋亡前后的表達量差異有顯著統計學意義(P < 0.05) 的肝癌細胞核蛋白42個, 其中, 12 個蛋白的表達量在羥基喜樹堿誘導細胞凋亡后下調, 30 個蛋白的表達量在凋亡細胞中上調。這些差異蛋白的分子功能主要與細胞增殖、凋亡和分化、能量代謝、核酸代謝以及細胞
骨架相關。