馬蹄內翻足大鼠模型踝部骨骼、組織及脊髓蛋白質組學分析

【摘要】　目的　應用全反式維甲酸(all2trans retinoic acid ,ATRA) 誘發Wistar 大鼠馬蹄內翻足模型為實驗材料,應用蛋白質學技術探討先天性馬蹄內翻足發病機理。方法　按135 mg/ kg 體重經口給予孕10 天Wistar 大鼠ATRA ,孕21 天剖檢胎鼠,提取畸形鼠和對照鼠脊髓、踝部組織(去除皮膚) 及踝部骨骼總蛋白,雙向電泳分離蛋白,考馬斯亮藍染色,PDQuest 軟件、質譜及生物信息學分析差異蛋白。應用半定量逆轉錄PCR 檢測馬蹄內翻足畸形鼠和對照鼠脊髓、踝部骨骼和脛骨后肌群組織xiap col2α1、tnnt1 和ngf r 基因表達。應用免疫組化染色檢測Xiap 蛋白表達。應用TUNEL 法進行脊髓、踝部骨骼細胞凋亡檢測。結果　經雙向電泳發現馬蹄內翻足模型胎鼠多種蛋白質表達存在差異,質譜及生物信息學進一步分析發現Ⅱ型膠原蛋白等16 種蛋白表達發生改變。逆轉錄PCR 檢測進一步證實xiap 、col2α1 在脊髓、踝部骨骼和脛骨后肌群組織表達下調, tnnt1 在踝部骨骼和脛骨后肌群組織表達下調, ngf r 在以上組織表達無異常。免疫組化染色進一步證實Xiap 蛋白表達下調。神經、骨骼細胞凋亡發生率是對照組細胞凋亡發生率的5. 4 和10倍。結論　馬蹄內翻足大鼠模型踝部組織(去除皮膚) 、踝部骨骼及脊髓多種蛋白質存在表達差異。Xiap 、Col2α1 和sTnT與馬蹄內翻足相關,Ngfr 與馬蹄內翻足無關。ATRA 可以誘導脊髓、骨骼凋亡發生率升高,與Xiap 表達下調有關,在馬蹄內翻足發生過程中發揮重要作用。