家蠶絲腺蛋白質組學研究方法的建立

摘　要　通過高精度的雙向電泳技術對家蠶中部絲腺組織的蛋白質進行分離,采用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(matrix2assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry ,MALDI2TOF2MS) 對其中一些表達量較高的蛋白點進行鑒
定,并利用GPMAW(General ProteinPMass Analysis for Windows) 軟件結合家蠶基因組預測的蛋白質數據庫構建本地的肽質量指紋圖譜數據庫,對所得到的肽質量指紋圖譜進行分析。研究發現,經過雙向凝膠電泳及其圖象分析技術,硝酸銀染色和考馬斯亮藍染色分別能分離出500 個以上和100 個以上的蛋白點。這些蛋白質點主要集中在分子量15～90kD 區域,等電點pH 315～7 之間。MALDI2TOF2MS 鑒定的25 個考染蛋白點中有60 %以上的PMF(Peptide Mass Fingerprint) 的信號峰較強。在數據庫檢索過程中,利用家蠶肽質量指紋數據庫所得檢索結果與在Mascot 的檢索結果相比,前者不僅能夠準確鑒定出一些已有研究報道的蛋白,從而驗證檢索方法的可行性,而且還能夠對一些已經被家蠶基因組數據庫所預測但未曾報道的新蛋白質進行鑒定,從而建立了一整套適合于家蠶蛋白質組研究的方法,并為其它絹絲昆蟲蛋白質組研究提供了重要參考。