利用羅氏xCELLigence系統實時監測細胞粘附和伸展

羅氏應用科學創新的xCELLigence系統讓研究人員能夠實時監測并定量評估細胞的粘附和伸展。這項技術是非侵入性的，也不需要費力且高成本的細胞標記及細胞裂解或固定。用戶利用這種快速經濟的方法，能在單個實驗中監測生物事件中基質蛋白的作用。

細胞外基質(ECM)蛋白如纖維連接蛋白與特定的細胞表面受體--整合素(Integrins)相互作用。整合素不僅調節細胞粘附，還通過與ECM 蛋白的相互作用啟始細胞內的信號級聯反應，指導不同的胞內進程。不同生物表面的細胞粘附是動態、綜合的過程，需要細胞表面受體、結構和信號蛋白以及細胞骨架的參與。

在一項xCELLigence系統的測評實驗中，E-Plate包被了一層纖維連接蛋白或對照肽段。NIH3T3細胞接種到包被過的孔中，并通過測量阻抗變化并隨時記錄細胞指數(CI)單位，來監測期間細胞粘附和伸展的程度。當細胞接種在纖維連接蛋白包被的孔中，CI值顯著增加，而接種到對照肽段孔中的CI值僅僅緩慢增加。另外，阻抗測量顯示，纖維連接蛋白包被的細胞傳感器上的細胞粘附程度取決于纖維連接蛋白的濃度(已通過手工細胞計數來驗證)。這些數據支持了我們的設想----采用這項技術，細胞粘附和伸展可以在無標記的條件下進行實時定量的評估。

為了驗證整合素受體功能的擾動是否可通過這項阻抗技術來評估，成纖維細胞與整合素抑制肽段共同孵育，然后接種到纖維連接蛋白包被的E-Plate中。利用xCELLigence系統，證實抑制劑能以濃度依賴的方式阻礙NIH3T3細胞粘附和伸展，而對照肽段無此作用。

肌動蛋白解離試劑在細胞粘附和伸展中的作用也能利用xCELLigence系統來監測。成纖維細胞與肌動蛋白聚合抑制劑共同孵育，然后接種到纖維連接蛋白包被的E-Plate中。肌動蛋白聚合抑制劑的存在實際上以濃度依賴的方式抑制了細胞粘附和伸展。

參與整合素調節的細胞粘附和伸展的信號蛋白群還包括非受體酪氨酸激酶類的Src家族。研究表明通過siRNA干擾或諸如PP2的小分子抑制劑干擾Src表達或活性，會導致人癌癥細胞粘附和伸展的破壞，這一結果與xCELLigence系統的監測結果相符。