蛋白質巰基亞硝基化對RSC - 364細胞cAMP反應元件結合蛋白活性的影響

[摘　要] 　目的: 觀察RSC - 364細胞外源性亞硝基化對cAMP反應元件結合蛋白(CREB)活性的影響。方法:提取RSC - 364細胞總蛋白,與100μmol/L 還原型谷胱甘肽( GSH) 、100 μmol /L NO供體亞硝基化谷胱甘肽(GSNO) 、10 mmol/L亞硝基化抑制劑二硫蘇糖醇(DTT)及溶劑單獨或聯合應用孵育15 min完成外源性亞硝基化,采用生物素轉化法與Western blotting技術檢測亞硝基化蛋白表達水平;分別用溶劑或重組大鼠白細胞介素- 1β( rIL - 1β) 10μg/L孵育RSC - 364細胞1 h,提取細胞核蛋白,經外源性亞硝基化后用電泳遷移率改變分析( elec2trophoresismobility shift assay, EMSA)觀察亞硝基化作用對CREB活性的影響。