葛根素的臨床前安全性研究及免疫增強作用研究

葛根素是從豆科植物野葛的干燥根中提純分離得到的有效成分，臨床前研究表明葛根素無蓄積毒性，對心、肝、脾、肺、腎等無明顯毒性，且具有抗心律失常、擴張血管、降血脂和增強免疫力等多種藥理作用。為了使上市新藥在臨床治療劑量下無毒，提高臨床使用的安全性需要進行藥物的臨床前安全性評價。　

臨床前研究是指藥物進入臨床研究之前所進行的化學合成或天然產物提純研究、藥物分析研究、藥效學、藥動學和毒理學研究以及藥劑學的研究。美迪西生物醫藥是一家從事臨床前研究外包服務（CRO）的公司，專門為客戶提供可定制的臨床前試驗服務方案，擁有十余年研發技術經驗積累，在藥物代謝、藥代動力學、藥效研究，以及毒理學方面有專業的知識。

1、葛根素的臨床前研究的毒性試驗

（1）急性毒性研究

醫學上通常指的急性毒性試驗是對藥物而言的，并以半數致死量（median lethal dose， LD50）來衡量藥物急性毒性的大小。所謂LD50是指某一藥物使試驗動物總體死亡一半的劑量，由于LD50是劑量反應曲線上最敏感的一點，而且有易測、準確和重復性好的優點，以此作為藥物使用的安全指標。在試驗過程中，通過對實驗動物進行動物靜脈或腹腔注射試驗材料或其浸提液來觀察實驗動物體重在24、48和72h的變化、運動、呼吸狀態以及死亡情況作為評價的指標，判定某種生物材料的急性毒性作用。

小鼠靜脈、腹腔注射葛根素的LD50分別為634.5mg/kg、1412.2mg/kg。小鼠灌胃及靜注葛根素（溶于生理鹽水）2g/kg，3次/d；狗靜注（溶于生理鹽水）50mg/kg*3d，均未見毒性反應。

（2）長期毒性研究

藥物以一定的等級劑量連續多日給予受試動物的有害作用，為觀察這種有害作用而設計的毒理學試驗稱之為長期毒性試驗。急性毒性試驗為一次性給藥或24h內多次給藥。長期毒性試驗為連續多日接觸一定劑量給藥，給藥期限可以從數天至終生甚至數代，一般為臨床用藥的3-4倍。

動物長期毒性實驗表明，葛根素無蓄積毒性，對心肝脾肺腎等無明顯毒性。致突變試驗顯示，葛根素無任何致突變活性。致畸試驗表明，葛根素對雌性大鼠胚胎及雄性大鼠生殖細胞均無制畸作用。大鼠肌注10、50mg/(kg.d)共3個月，狗靜注10、30mg/(kg.d)共4周，體重、血象、心電圖、肝腎功能及重要器官組織學檢查，未見異常。唯狗30mg/kg大劑量組于給藥后表現興奮，5分鐘后恢復正常。

2、葛根素注射液臨床前研究之安全性試驗

（1）血管刺激性試驗

給家兔耳靜脈緩慢滴注葛根素注射液，劑量為10ml/kg，每日一次，連續三日。結果發現家兔耳靜脈給藥部位肉眼觀察無明顯變化；病理切片顯微鏡檢顯示距注射部位1cm處血管和5cm處血管內皮連續、完整， 未增生、腫脹；血管周圍組織未見炎性細胞浸潤及壞死；管腔內無血栓形成。葛根素注射液對家兔耳靜脈血管未見明顯刺激作用。

（2）過敏性試驗

給豚鼠腹腔注射葛根素注射液0.5ml，隔日1次，共3次，給藥后第14天及第21天分別股靜脈注射該藥1ml/只，結果均未見豚鼠有過敏反應。給予1%新鮮蛋清的豚鼠在給予蛋清后第14 天及第21天分別股靜脈注射蛋清后均出現過敏反應，且皆于15分鐘內死亡。

（3）溶血試驗

葛根素注射液50mg/ml濃度，在體外試驗條件下，在加樣0.25 ～ 3.0小時內對家兔紅細胞無溶血作用和紅細胞凝集反應。

3、葛根素的免疫增強作用的臨床前研究

多個學者的研究結果證實，葛根素具有降低心肌和腦缺血狀態下如TNF-α或IL-6、ET-1等細胞因子的釋放。其機制可能與抑制中性粒細胞內NF-κB活化有關。觀察葛根素對免疫抑制模型小鼠細胞免疫功能的影響，初步研究其作用機制。

方法是通過小鼠體重、臟器指數以及IFN-γ/IL-4比值等，檢測葛根素對免疫抑制模型小鼠細胞免疫功能的影響。結果發現免疫抑制模型小鼠體重、臟器指數以及IFN-γ/IL-4比值都顯著下降。葛根素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組小鼠體重、臟器指數以及IFN-γ/IL-4比值都顯著升高。因此葛根素提高小鼠的細胞免疫功能，其機制可能和促進脾臟T淋巴細胞增值，糾正T淋巴細胞亞群Th1/Th2比例紊亂有關。

此外葛根素還具有抗癌及抗腫瘤作用。細胞色素P450是藥物代謝系統中一組重要的酶，主要參與藥物的代謝。葛根素在一定濃度內能明顯抑制黑色素細胞的增殖。研究者采用免疫細胞化學方法，觀察葛根素對癌細胞增殖凋亡的影響，發現隨著劑量的增加，藥物對癌細胞的抑制也增強，可顯著抑制癌蛋白的表達，這可能與抑制氧化損傷有關。