毛細管氣相色譜法測定止咳枇杷顆粒中薄荷腦的含量

　　止咳枇杷顆粒由枇杷葉、桑白皮、白前、百部、桔梗、薄荷腦、蔗糖等制成，具有清肺、止咳、化痰的功效，用于咳嗽多痰、支氣管炎等。現行的部頒標準中藥成方劑第二冊WS3—B—0212—90質量標準中收載了該制劑，只作了定性鑒別，無定量檢測方法。本文應用毛細管氣相色譜法測定止咳枇杷顆粒中薄荷腦的含量，為止咳枇杷顆粒的質量控制提供依據。

　　1 儀器與材料

　　GC2010氣相色譜儀(日本島津);GCsolution 氣相色譜工作站;SPL毛細管柱進樣口;Wax10毛細管柱(Supel co公司)(0.32 mm×30 m×0.25 μm)。

　　止咳枇杷顆粒(廣州奇星藥業有限公司)，薄荷腦對照品(072800005，中國藥品生物制品檢定所);水楊酸甲酯(110707200609，內標用，中國藥品生物制品檢定所)，其余試劑均為分析純。

　　2 方法與結果

　　2.1 色譜條件

　　色譜柱： Wax10毛細管柱(0.32 mm×30 m×0.25 μm)，柱溫為110 ℃，進樣口溫度為250 ℃，檢測器溫度為250 ℃;FID檢測器。載氣為高純度氮氣，流速：1.0 ml/min，進樣量為1 μL。薄荷腦、水楊酸甲酯(內標)的理論塔板數不低于5000。色譜圖見圖1。

　　A.薄荷腦對照品; B.樣品; C.陰性樣品

　　圖1 氣相色譜圖(略)

　　Figure 1 Gas chromatograms

　　2.2 樣品測定方法

　　2.2.1 內標溶液的制備 精密稱取水楊酸甲酯適量，置500 mL量瓶中，用無水乙醇配制成0.223 9 mg/mL的溶液，搖勻，即得。

　　2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取薄荷腦66.83 mg，置50 mL量瓶中，加內標溶液溶解并定容，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液5 mL，置20 mL量瓶中，加內標溶液溶解并定容，搖勻，作為對照品溶液。

　　2.2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，精密稱取本品5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入內標溶液20 mL，超聲20 min，取上清液用濾膜過濾，取續濾液，即得。

　　2.2.4 測定方法 分別精密吸取對照品和供試液各1 μL，注入氣相色譜儀，測定薄荷腦對照品和水楊酸甲酯峰面積，計算校正因子，按內標法計算即得。

　　2.3 方法學考察

　　2.3.1 線性關系考察 精密吸取上述薄荷腦對照品儲備液適量，用內標溶液制成薄荷腦質量濃度分別為0.668 3、0.528 3、0.325 1、0.261 2、0.103 9、0.051 7 mg/mL的系列溶液(內標溶液質量濃度為0.223 9 mg/mL)，分別吸取上述溶液1 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以薄荷腦質量濃度為橫坐標，以薄荷腦峰面積與內標峰面積之比為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y=0.7134X+0.00005，r=1.000 0(n=6)，結果表明薄荷腦在0.051 7～0.668 3 mg/mL范圍內線性關系良好。

　　2.3.2 穩定性試驗 取同一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、24 h進樣測定，結果薄荷腦平均質量分數為0.1010%，RSD為0.30%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

　　2.3.3 精密度試驗 取同一份供試品溶液，重復進樣6次，結果供試品中薄荷腦平均質量分數為0.1009%，RSD為0.30%(n=6)。

　　2.3.4 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品6份，每份約2.5 g，精密稱定，分別精密加入上述對照品儲備液適量，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，依次測定，測得平均回收率為101.1%，RSD為2.0%，見表1。

　　2.3.5 重復性試驗 取同一批號的止咳枇杷顆粒6份，按“2.2”測定方法測定含量，6份樣品的薄荷腦含量的RSD為1.8%，表明本方法重復性較好。

　　2.4 樣品測定

　　取3批樣品，按照“2.2.3”項的方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件下進行測定，3批樣品的質量分數分別為0.1089%、0.1125%、0.1250%。

　　表1 止咳枇杷顆粒加樣回收率試驗(略)

　　Table 1 Recovery of Zhike Pipa granule

　　3 討論

　　3.1 色譜條件的選擇

　　參考文獻[1]，采用柱溫：150 ℃、FID檢測器溫度：190 ℃、進樣口溫度：190 ℃的條件，薄荷腦峰與雜質峰分不開。參照部頒標準[4]改為柱溫：110 ℃、FID檢測器溫度：250 ℃、進樣口溫度：250 ℃，薄荷腦峰和雜質峰分離良好。

　　3.2 提取溶劑的選擇

　　參考文獻[1～3]選用無水乙醇為提取溶劑，水楊酸甲酯為內標物。

　　3.3 提取方法的選擇

　　比較了無水乙醇加熱回流提取和超聲提取2種方法對薄荷腦的提取效果，結果表明加入20 mL內標溶液回流0.5 h與加入20 mL內標溶液超聲提取效果基本一致，薄荷腦質量分數分別為0.1002%和0.0972%，RSD為2.0%。考慮到超聲20 min提取方法方便、快捷，為節約時間和成本，采用超聲20 min的方法作為提取方法。

　　3.4 色譜柱的選擇

　　比較Wax10毛細管柱和AT1毛細管柱的分離效果，結果Wax10毛細管柱氣相色譜的峰形和出峰時間比較適中，而AT1不理想。

　　【參考文獻】

　　[1] 張雪，邵燕虹，張慧敏.氣相色譜法測定蒼耳子鼻炎膠囊中薄荷腦和龍腦的報告[J].醫學綜述，2008，14(20)：7913-7914.

　　[2] 楊敏，劉吉金.氣相色譜法測定蜜煉川貝枇杷膏中薄荷腦和苯甲醛的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2008，14(8)：32-42.

　　[3] 陳月英，莫云燕，林子夏，等.毛細管氣相色譜法測定止癢靈中的苯酚和薄荷腦[J].廣東藥學院學報，2007，23(2)：245-246.

　　[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國衛生部部頒標準中藥成方劑第二冊[M].北京：化學工業出版社，2002：216.