大鼠海馬組織線粒體的蛋白質組學分析方法的建立①

摘　要　為了建立蛋白質組學技術平臺用于分離分析大鼠海馬組織線粒體的蛋白質組成,選用成年雄性Wistar大鼠使用差速離心法分離提純大鼠海馬組織線粒體,經透射電子顯微鏡觀察分析、免疫印跡檢測細胞器標志物蛋白含量后確定線粒體提純物的質量;將線粒體制備成蛋白樣品,經雙向電泳分離、染色、掃描獲得二維蛋白斑點圖后,切取含蛋白斑點的膠塊處理后進行基質輔助的飛行時間生物質譜分析,所得數據經檢索匹配識別出蛋白信息。獲得的大鼠海馬組織線粒體提純物在透射電子顯微鏡下呈現為大量形態完整、典型的線粒體,夾雜少量其它成分和線粒體碎片;免疫印跡結果顯示線粒體提純物蛋白中含有大量穩定表達的線粒體標志蛋白COX2IV;線粒體提純物中沒有檢測到細胞核標志蛋白histone21。雙向電泳分離得到的二維蛋白斑點圖譜匹配率為77. 54% ±5. 51%,并成功鑒定識別出膠中的線粒體蛋白丙酮酸脫氫酶alpha亞基。上述結果表明已經成功建立了缺血敏感腦區海馬組織的線粒體蛋白質組學分析方法,所得線粒體純度高、蛋白樣品重復性高、電泳分離效果好、與生物質譜鑒定技術匹配良好,為開展腦缺血的線粒體蛋白質組學研究打下了基礎。