采用蛋白質組學技術篩選鼻咽癌細胞的甲基化沉默基因

摘要 為篩選鼻咽癌的甲基化沉默基因，采用二維凝膠電泳(2-DE)技術分離甲基轉移酶抑制劑5- 雜氮-2′-脫氧胞苷(5-aza-2-dC)處理與未處理鼻咽癌細胞5-8F 的蛋白質，PDquest 圖像分析軟件識別差異蛋白質點，基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)鑒定差異蛋白質. 然后采用Western blotting 和RT-PCR 檢測差異蛋白質nm23-H1 在藥物處理與未處理5-8F 細胞中的表達水平，采用甲基化特異性PCR(MS-PCR)檢測nm23-H1 基因在藥物處理與未處理5-8F 細胞中的甲基化水平. 建立了5-aza-2-dC 處理與未處理5-8F 細胞蛋白質的2-DE 圖譜，識別了49 個差異表達的蛋白質點，鑒定了33 個差異表達的蛋白質，其中包括nm23-H1 在內的15 個蛋白質在5-aza-2-dC 處理后的5-8F 細胞中表達上調，而18 個蛋白質表達下調. Western blotting 和RT-PCR 結果顯示，nm23-H1 在5-aza-2-dC 處理5-8F 細胞后表達上調，MS-PCR 結果顯示，在5-aza-2-dC 處理5-8F 細胞后nm23-H1 基因甲基化水平下降，結果證實，nm23-H1 基因是5-8F 細胞中的甲基化沉默基因. 15個5-aza-2-dC 處理后表達上調的基因可能是5-8F 細胞中的甲基化沉默基因，為篩選鼻咽癌甲基化失活基因提供了科學依據.