極端嗜熱古菌——芝田硫化葉菌DNA 解旋酶的分離純化和性質研究

摘　要:采用Q Sepharose 離子交換層析、磷酸纖維素P11 吸附層析、肝素瓊脂糖吸附層析、Su2perdex 200 凝膠過濾和Phenyl Superose 疏水層析等步驟,從嗜酸熱芝田硫化葉菌細胞裂解液中分離純化了一個DNA 解旋酶。該解旋酶具有受DNA 激活的ATP 酶活性。根據SDS2PAGE 測定結果,該酶的分子質量約為63kD。芝田硫化葉菌DNA 解旋酶可以解開底物上70bp 的雙鏈區,其解旋活性依賴于雙鏈區旁的單鏈分叉。該解旋酶的活性依賴于Mg2 + 和ATP 的水解,在NaCl 濃度超過200mmolPL 時受到抑制。該酶的最適pH 為617。該酶在40 ℃～80 ℃之間均有活性,70 ℃時活性最高。芝田硫化葉菌DNA 解旋酶是從古菌中分離得到的第一個天然DNA解旋酶。