幽門螺桿菌hpaA 基因工程菌蛋白表達條件優化、純化及其活性鑒定

摘要　目的:優化幽門螺桿菌hpaA 基因工程菌(pMAL2c2X2hpaA2TB1) 的表達條件,并對其表達產物進行純化和免疫活性鑒定。方法:通過誘導表達實驗了解不同誘導時機、誘導劑濃度、誘導時間對蛋白表達量的影響, 并應用SDS2PA GE 方法對表達產物進行分析;Amyloss 樹脂預裝柱對可溶性HpaA 蛋白進行分離、純化;對純化后蛋白做Western blot 實驗鑒定免疫活性。結果:該工程菌培養2 h 時加入異丙基2β2D 硫代半乳糖苷( IPTG) 終濃度為013 mmol/ L 進行誘導4 h ,目的蛋白表達量達到菌體總蛋白的30 %以上;經純化得到了較高純度( > 90 %) 的目的蛋白,并具有良好的免疫活性。結論:建立了從TB1 (pMAL2c2X2hpaA) 可溶性表達產物中純化高純度rHpaA 融合蛋白的方法,為進一步的動物實驗和診斷性抗原的研制以及工程菌發酵、高效表達生產工藝的研究打下了基礎。