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  • 流式細胞儀的檢測和免疫表型分析

    上一篇 / 下一篇  2012-06-07 16:34:04

      一、流式細胞儀檢測的質量控制

      1、樣品與試劑

      血液、骨髓、體液等必須當天采集,6 h之內進行免疫熒光染色;活化血小板檢測應在采血后立即染色與固定。組織樣品可采用機械法去聚集并過濾,最好用單細胞制備儀(medimachine)處理。試劑、緩沖液、溶血劑、固定劑等必須符合標準

      2、對照設置:目的是避免各種因素可能造成的假陽性或假陰性反應。

      ①同型對照:與單克隆抗體(MoAb)相同的、未免疫小鼠標記熒光素的免疫球蛋白亞類作對照。主要考慮細胞的自發熒光、非特異性抗體結合等影響因素。

      ②陽性對照:已知陽性標本能否確定為陽性。達不到要求時不能進行臨床試驗。

      ③陰性對照:用已知不表達某種抗原的細胞作樣品檢測,應出現陰性。目的是避免實驗的非特異性反應。

      ④正常對照:對一種新的MoAb,在使用前進行對照試驗,可保證儀器在最佳條件下獲取樣品。

      ⑤質控品: 試劑廠方提供與待測樣品成分相近的穩定的質控物,并提供檢測項目的靶值和質控范圍,作為某一試驗項目的全程質量檢測物,評估試驗結果的可靠性。如BDMulti-Check Control 是淋巴細胞及其亞群分析的全血質控品。

      3、儀器的校準與性能檢測

      使用標準熒光微球,運行FACSComp軟件,校準通過,表明儀器狀況良好。

      二、流式細胞儀的功能和臨床應用

      流式細胞儀最大的貢獻在于促進了免疫學基礎研究和臨床診斷。目前流式細胞術已被廣泛用于細胞生物學、免疫學、腫瘤學、血液學、病理學、遺傳學和臨床檢驗等多學科領域的基礎和臨床研究。

      三、輔助白血病和淋巴瘤分型和診斷

      FCM是血液病MICC分型法中免疫表型分析的重要手段。免疫分型可為臨床指導治療,判斷預后,預測復發提供幫助。

      (1)白血病系列分化抗原:

      T淋巴細胞白血病:CD3、CD5、CD7、CD10

      B淋巴細胞白血病:CDl9、CD20、CD21、CD22,CDl0

      NK細胞白血病:CDl6、CD56、CD57

      粒細胞白血病:CDl3、CD33、MPO(髓過氧化酶)

      單核細胞白血病:CDl4、CDl5、 CDl1b

      紅血病:血型糖蛋白A(glycophorinA),CDl3

      巨核細胞白血病:CD41,CD42、CD61

      (2)白血病系列非特異性抗原:CD34+、HLA-DR+、CD38-為干細胞、CD34+、HLA-DR+、CD38+為原始細胞,CD34-、HLA-DR-、CD38+為幼稚細胞。

      白血病細胞系列確定后,可根據系列抗原表達特點選擇單抗進一步分亞型。


    TAG: 流式細胞儀

    shark423 引用 刪除 shark423   /   2012-06-08 15:31:57
    挺有研究性的,謝謝分享
     

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