同源重組法構建多功能農藥降解基因工程菌研究

摘　要　構建遺傳穩定的多功能農藥降解基因工程菌可以為農藥污染的生物修復提供良好的菌種資源,然而,構建遺傳穩定且不帶入外源抗性的基因工程菌是一個難點。通過以受體菌的16S rDNA 為同源重組指導序列、sacB 基因為雙交換正篩選標記構建同源重組載體,二親結合的方法將甲基對硫磷水解酶基因( mpd) 整合到呋喃丹降解菌Sphingomonas sp. CDS21 染色體的16S rDNA 位點,分別成功構建了含1 個和2 個mpd 基因插入到rDNA 位點且不帶入外源抗性的基因工程菌株CDS2mpd 和CDS22mpd。同源重組單交換的效率為317 ×10 - 7～618 ×10 - 7 。通過PCR 和Southern 雜交的方法驗證了同源重組事件。基因工程菌遺傳穩定,能同時降解甲基對硫磷和呋喃丹。甲基對硫磷水解酶(MPH) 的比活在各生長時期均高于原始出發菌株,比活最高達6122 muPμg。