HCV 非結構蛋白質5A 基因全長和高免疫源區的表達及免疫活性檢測

【摘要】目的 探討 HCV 非結構蛋白質 5A（NS5A）基因全長和高免疫源區的表達并比較其檢測靈敏度。方法 以含 HCV 全基因組的質粒 pBRtm/HCV-3011（1b型）為模板，采用 PCR 方法擴增出 NS5A 全長基因（以下用 NS5AL 代替）和高免疫源區基因（以下用 NS5AS 代替），與 pET-32a 載體相連接構建重組表達載體pETNS5AL和 pET-NS5AS，分別轉化 E.coli Rosetta（DE3）pLysS 和 BL21（DE3） 感受態細胞，經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導后，蛋白質印跡法檢測其表達，鎳螯合（Ni2+-NTA）瓊脂糖親和層析柱純化重組 NS5AL 和NS5AS 蛋白，最后通過ELISA 法檢測重組蛋白的免疫活性并對其檢測靈敏度進行比較。