《
色譜》2008年02期
重組人
干擾素-γ的制備與鑒定
吳丹;高棟;白泉;耿信篤
用聚乙二醇200疏水相互作用色譜固定相(PEG200-STHIC)分別在色譜柱和色譜餅上完成了一步復性并同時純化來源于大腸桿菌(E.coli)表達的重組人干擾素-γ(rhIFN-γ)。為了能使色譜分離方法用于不同來源的rhIFN-γ的純化,對rhIFN-γ在反相色譜、離子交換色譜、固定化鎳離子親和色譜上的保留行為也進行了研究。色譜柱純化的rhIFN-γ收集液經排阻色譜除鹽和冷凍干燥得到rhIFN-γ干粉。用基質輔助激光解吸電離飛行時間
質譜對rhIFN-γ干粉進行了
測定,rhIFN-γ單體的相對分子質量為17184.0,二聚體的相對分子質量為34204.4。用
細胞病變抑制法(CPEI)測定rhIFN-γ干粉的比活性為9.5×108IU/mg。用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)測定rhIFN-γ干粉的純度高于95%。用色譜柱復性并同時純化rhIFN-γ的質量回收率達到93.7%,純度高于95%,比活性為4.3×107IU/mg。結果表明,采用PEG200-STHIC色譜柱復性并同時純化rhIFN-γ是一種十分高效的方法。
【作者單位】：西北大學現代分離
科學研究所現代分離科學陜西省
重點實驗室 西北大學合成與天然功能分子
化學教育部重點實驗室;西北大學現代分離科學研究所現代分離科學陜西省重點實驗室;西北大學合成與天然功能分子化學教育部重點實驗室;西北大學現代分離科學研究所現代分離科學陜西省重點實驗室;西北大學合成與天然功能分子化學教育部重點實驗室;西北大學現代分離科學研究所現代分離科學陜西省重點實驗室;西北大學合成與天然功能分子化學教育部重點實驗室;陜西西安710069;陜西西安710069;陜西西安710069;陜西西安710069
【關鍵詞】：重組人干擾素-γ;蛋白折疊
液相色譜法;高效疏水色譜;復性;純化
【基金】：國家
自然科學基金資助項目(No.20475042);國家“863”計劃項目(No.2006AA02Z227)
【分類號】：TQ467
【DOI】：CNKI:SUN:SPZZ.0.2008-02-019
【正文快照】：
液相色譜(LC)用于
蛋白質的復性是近十幾年來迅速發展起來的一種新的復性方法,被稱為
蛋白折疊液相色譜法(protein folding liquid chromatog-raphy,PFLC)[1]。高效疏水相互作用色譜(highperformance hydrophobic interaction chromatog-raphy,HPHIC)是PFLC中最常用的色譜復性方
