作者:陳國征,錢洪智,王炫征,蔣斌
尿中鉛含量的測定對于鉛吸收或鉛中毒的診斷和治療具有重要意義。目前,尿中鉛的測定方法主要有雙硫腙比色法、示波極譜法、火焰、氫化物原子吸收光譜法和石墨爐原子吸收光譜法,其樣品消化一般為硝酸-高氯酸法。本文建立了硝酸-過氧化氫法消化-石墨爐原子吸收光譜測定的方法,樣品消化具有快速、安全、批處理量大等優點,適合于大樣本的快速分析。本法應用于職業人群中尿鉛測定,取得了滿意的結果。
1 材料與方法
1.1 儀器
島津公司AA-6800原子吸收分光光度計, GFA-6500石墨爐,高密度石墨管,鉛空心陰極燈; DTD-3型數字恒溫消解儀-60孔(齊齊哈爾市衛生防疫站分析儀器研究所);長15cm,內徑115cm玻璃試管。
1.2 試劑
鉛標準溶液1000 mg/L(國家標準物質研究中心) ,臨用時用0.5% 硝酸稀釋成1.0μg/ml標準使用液,硝酸為重蒸餾優級純;過氧化氫(分析純) ;磷酸二氫氨溶液120g/L(優級純) 。
1.3 方法
1.3.1 樣品處理 吸取1.0 ml 尿樣于試管中, 加0.5mlHNO3 和1.0 ml H2O2 于130℃溫度下消化至樣品純清透明,氣泡消除為止(約30 min) ,放冷,移入加有1.0 ml磷酸二氫氨溶液的10ml容量瓶中,用純水定容至刻度。吸取10μl注入石墨爐測定,同時做試劑空白。
1.3.2 鉛標準曲線 吸取鉛標準使用液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 ml于5只加有10 ml磷酸二氫氨溶液的100 ml容量瓶中,用0.5% (v/v) HNO3溶液定容至刻度,分別配成鉛濃度為10、20、40、60、80μg/L 標準系列。
1.3.3 儀器工作條件 測量波長283.3 nm,燈電流10 mA,狹縫0.5 nm,D2 燈扣除背景。石墨爐工作條件。
2 結果與討論
2.1 消化溫度選擇
過氧化氫在消化過程中會產生大量氣泡,當消化溫度大于150℃時,反應過于激烈,氣泡逸出試管,造成樣品損失。
實驗采用130℃,在此溫度條件下消化,既能避免反應過激現象,又能使有機質徹底消化。
2.2 試劑用量的選擇
分別0.5 ml HNO3 + 1.0 ml H2O2、1.0 ml HNO3 + 1.0 mlH2O2、1.0 ml HNO3 + 0.5 ml H2O2 對樣品進行消解,當HNO3加入量為1.0 ml, H2O2 為0.5 ml消解不徹底,再加入0.5 mlH2O2 則消化完全。而當H2O2 加入量為1.0 ml時,加0.5 mlHNO3 ,即可把樣品消化完全。因此試劑用量采用0.5mlHNO3 + 1.0ml H2O2。
2. 3 灰化溫度的選擇
取鉛含量為51μg/L 樣品消化液加入基體改進劑磷酸二氫氨后,在不同灰化溫度下測得吸光度可知,當灰化溫度為700℃時,吸光度最大,故采用灰化溫度為700℃。
2.4 原子化溫度的選擇
選擇好干燥參數和灰化參數條件下,依次從1700℃～2400℃改變原子化溫度對同一樣品加以測定,結果表明在不同原子化溫度下測得吸光度均穩定且無顯著差異,故選擇1700℃為原子化溫度。
2.5 基體改進劑及用量的選擇
磷酸二氫氨和二氯化鈀是測定鉛時常用的的基體改進劑,消化液中如不加基體改進劑,原子化后靈敏度低,峰形雙峰,加入磷酸二氫氨后,峰形尖銳,靈敏度大大增高。考慮到二氯化鈀價格昂貴,而尿樣中有機質經消化分解徹底,背景干擾很小,用磷酸二氫氨完全滿足測定要求。故采用磷酸二氫氨作為基體改進劑。取含量為51μg/L 尿樣消化液9.0 ml于6只10 ml容量瓶中,各加入磷酸二氫氨溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0 ml,用純水定容至刻度,測其吸光度,結果當在磷酸二氫氨大于0.4ml時,吸光度不再隨磷酸二氫氨含量升高而增加。由于磷酸二氫氨量應滿足在線性條件下更高濃度鉛的測定,故實驗加入磷酸二氫氨(120g/L)的量為1.0ml。
2.6 精密度試驗
取3份測定值分別為15.5、36.8、61.5μg/L 尿樣,按上述方法處理后每份各進行6次測定,其相對標準偏差依次為4.5%、4.2%、3.6%。
2.7 回收率試驗
取尿樣加標后按上述方法處理,測其回收率結果。
2.8 標準曲線與檢出限
在實驗條件下,標準曲線在0～80μg/L 范圍內線性良好,為相關系數r = 0.9997,回歸方程[ABS] = 0.03378C + 0.0525,方法檢出限為7.58μg/L,能滿足鉛吸收和中毒病診斷的要求。
3 小結
用硝酸-過氧化氫作試劑,DTD-3型數字恒溫消解儀消解,石墨爐原子吸收光譜法測定尿鉛具有以下優點:一次能同時消化尿樣60份,操作簡單、快速、回收率高,背景干擾小、結果準確可靠,適合用于職業接觸人群中大樣本尿鉛的測定。