SILAC (Stable Isotope Labeling with Amino Acids in Cell Cultures)

2002年，丹麥Mann實驗室的Ong等對AACT技術作了進一步改進，建立了SILAC技術并首次應用于定量蛋白質組研究，為全面、系統地定性和定量分析復雜哺乳動物細胞蛋白質組提供了有效的方案。

原理：SILAC的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩定同位素(重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養基中相應氨基酸，細胞經5-6個倍增周期后，穩定同位素標記的氨基酸完全摻入到細胞新合成的蛋白質中替代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數或蛋白量等比例混合，經分離、純化后進行質譜鑒定。

 

1、SILAC是體內標記技術，穩定同位素標記的氨基酸與天然氨基酸化學性質基本相同，對細胞無毒性，因而它所標記的細胞和未標記細胞在生物學行為上幾乎沒有差異，標記效率可高達100％

2、與化學標記相比，SILAC方法蛋白需要量明顯減少

3、活體標記，更接近樣品真實狀態

4、只適用于活體培養的細胞對于生物醫學研究中常用的組織樣品，體液樣品等無法分析

5、對于動物模型的標記成本太大，無法實現

儀器：Finnigan LTQ

我們發表的論文：

Liu-Ya Tang, Ning Deng，et,al.Quantitative Phosphoproteome Profiling of Wnt3a Mediated Signaling Network: Indicating the Involvement of Ribonucleoside-diphosphate Reductase M2 Subunit Phosphorylation at Residue Serine-20 in Canonical Wnt Signal Transduction  MCP Papers in Press. Published on August 12, 2007 as Manuscript. M700120-MCP200