Label-free 蛋白質組學非標記定量技術

目前，蛋白質組研究的實驗技術流程一般為樣品(蛋白混合物) 經二維凝膠電泳，染色，膠上蛋白酶切，進入質譜鑒定；或樣品(蛋白混合物) 直接經酶切，色譜分離，進入質譜進行鑒定。

在二維凝膠電泳的實驗中，可以通過比較染色后的2 張2DE-gel 圖像中蛋白點的光密度值進行差異定量，或比較同種蛋白經同位素標記和未經標記的串聯質譜峰面積進行差異定量。但這兩種常用技術由于在樣品處理上費時費力，不利于大規模的蛋白質組定量。

因此，興起了無標記的質譜定量方法，這種方法只需分析大規模鑒定蛋白時所產生的質譜數據，用蛋白相應肽段的質譜數據進行定量。

非標記定量技術在定量蛋白質組學研究中受到了眾多科學工作者的推崇。目前，已經有一系列配套的非標記定量分析軟件，其中包括的GE公司開發的DeCyder MS^TM商業化軟件，實踐證明其具有很好的定量準確性和可信性。

原理：

DeCyder MS^TM軟件對液相色譜串聯質譜數據非標記定量分析是將質譜數據由譜峰形式轉化為直觀的類似雙向凝膠的圖譜，譜圖上每一個點代表一個肽段，而不是蛋白質；再比較的不同樣本上相應肽段的強度，從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。

特點：

1、對液相色譜串聯質譜的穩定性和重復性要求較高

2、無需昂貴的同位素標簽做內部標準，實驗耗費低

3、對樣本的操作也最少，從而使其最接近原始狀態，并且不受樣品條件的限制，克服了標記定量技術在對多個樣本進行定量方面的缺陷。

儀器：Finnigan LTQ