在第14天,細胞失去細長的成纖維細胞樣形態,開始呈現出成骨細胞樣的形態,然后在第21天開始出現鈣沉積,發展過程與親本的MSC對照類似(圖5)。這表明基因編輯后的MSC其成骨分化能力并沒有因為基因編輯和篩選過程而受到影響。?圖5:RANKL基因敲除的間充質干細胞(g23d)和親本間充質干細胞的培養和成骨分化。(圖片來源:文獻1)。?...
最后作者選出一株雙等位基因敲除的間充質干細胞(g23d)檢測其成骨分化的能力,并以未編輯的 MSC 為對照開展平行實驗。細胞轉移到成骨分化培養基后,分別在第 7 天、14 天和 21 天用茜素紅染色。在第 14 天,細胞失去細長的成纖維細胞樣形態,開始呈現出成骨細胞樣的形態,然后在第 21 天開始出現鈣沉積,發展過程與親本的 MSC 對照類似(圖 5)。...
4細胞增殖實驗:細胞負載的生物墨水樣本進行活細胞培養,在不同時間點進行 CCK8 測試,檢測不同生物墨水負載后細胞的增殖能力。5ALP 活性/鈣沉積實驗:細胞在支架表面黏附增殖后,在成骨培養基中逐漸分化,通過 ALP 活性實驗和鈣沉積實驗評估 3D 支架的成骨能力,ALP 活性采用 ALP 檢測試劑盒在 405nm 檢測吸光度,鈣沉積采用 ARS 染色法,在 540nm 處檢測吸光度。...
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