ASTM E2186-02a(2016)由美國材料與試驗協會 US-ASTM 發布于 2002。
ASTM E2186-02a(2016)在國際標準分類中歸屬于: 07.100.01 微生物學綜合。
1.1 彗星測定可輕松用于收集 DNA 鏈斷裂的數據 (9,25,26)。它是一種簡單、快速且靈敏的方法,可以比較不同細胞群中的 DNA 鏈損傷。如本指南中所述,該測定有助于檢測單個細胞中的 DNA 單鏈斷裂和堿性不穩定位點,并可以確定它們相對于對照或參考細胞的豐度 (9,16,26)。該檢測具有許多優點;測量單個細胞中 DNA 的損傷,只需采樣極少量的細胞即可進行測定(<108201;000),該測定幾乎可以在任何真核細胞類型上進行,并且已在比較研究是檢測 DNA 損傷的非常靈敏的方法 (2, 27) 。
5.1.2 這些是一般準則。該測定有多種程序變體。使用的變化取決于所檢查的細胞類型、感興趣的 DNA 損傷類型以及進行檢測的實驗室的成像和分析能力。為了使 DNA 可視化,可以用熒光染料對其進行染色,或者為了進行光學顯微鏡分析,可以對 DNA 進行銀染 (28)。本指南僅描述熒光染色方法。 DNA 遷移的顯微測定可以使用目鏡測微儀通過肉眼進行,也可以使用圖像分析軟件進行。可以使用校準的目鏡測微計或根據遷移程度將細胞分為四到五類來進行肉眼評分 (29, 30)。圖像分析系統由連接到熒光顯微鏡的 CCD 相機以及專門設計用于捕獲和分析熒光染色細胞核圖像的軟件和硬件組成。使用這樣的......
圖2,Comet Assay規格及Cytation對應適配器圖3,Cytaiton自動化成像系統對2-well,3-well和96well規格的CometAssay樣品成像結果。可以看出,上排DNA無斷裂損傷的樣品,每個細胞呈現圓形,而有DNA損傷的樣品則有明顯的彗星狀拖尾。????得到了清晰的圖像之后,如果需要測定DNA損傷的情況,就必須要進行精確的圖像分析。...
中性彗星實驗主要用于檢測DNA雙鏈的斷裂損傷,堿性彗星實驗具有更高的靈敏性,可用于檢測更少量的單鏈和雙鏈斷裂損傷。需要注意的是,試驗過程中的個方面,包括樣品準備、電泳條件、視覺分析參數(如染色強度、顯微鏡光強度以及使用顯微鏡濾鏡和相機動態和環境條件(如背景照明)已經被研究,可能影響DNA遷移。?...
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