注:用緩沖液 A+0.3%SKL 進行第一次稀釋是為了溶解樣品 A 中的包涵體。包涵體不溶解可導致σ32 與溶液隔離,根據我們的經驗,這會使樣品 A 中的σ32 量估低 8 倍!2) 預濕硝酸纖維素膜,先在 Milli-Q 純水器制備的水中預濕 2 min, 再在 TBS 中濕 5 min。...
1.2 儀器V-1300型分光光度計 ??? 2 實驗方法 ??? 2.1 標準曲線制作 ??? 分別吸取0.00、0.05、0.10、0.30、0.50、0.70ml胡椒堿標準使用溶液于10.0ml比色管中,用無水乙醇稀釋至刻度,混勻。用1cm比色杯,以無水乙醇作參比,于波長342nm處測吸光度,繪制標準曲線。 ???...
在完成親和純化后,酶的純度可用SDS-PAGE檢測并定量測定其比活性。 (二)蛋白磷酸激酶的活性分析 蛋白激酶活性分析分為兩步: ①末端標記的三磷酸核苷核供體(通常是ATP,有時用GTP)中的磷酸基團轉移到蛋白質或肽底物上; ②將磷酸化的底物分離出并進行定量分析。 前者通常在溶液中進行,酶和底物均在液相中。...
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