GB/T 38477-2020
基因表達的測定 蛋白印跡法
Determination of gene expression—Western blot
GBT38477-2020, GB38477-2020
標準核心內容解析
本標準確立了蛋白印跡法測定基因表達的完整技術體系，包含8個關鍵步驟：總蛋白提取→濃度測定→SDS-PAGE→轉膜→封閉→免疫反應→成像→結果分析。
關鍵技術參數對比
| 技術環節 | 動物樣本要求 | 植物樣本要求 | 關鍵設備 |
|---|---|---|---|
| 蛋白提取 | 20mg組織/細胞 | 試劑盒提取 | 低溫離心機 |
| SDS-PAGE | 100ng上樣量 | 垂直電泳槽 | |
| 轉膜 | 0.65mA/cm2電流 | 轉膜儀 | |
標準實施要點
典型應用案例
在肝癌標志物檢測中，使用本標準方法檢測AFP蛋白表達時：
- 采用12%分離膠（按附錄A表A.1配制）
- 轉膜時間控制在2小時（分子量約70kDa）
- ECL顯色3分鐘獲得最佳信噪比
標準演進背景
本標準首次將Western blot技術規范化，相比實驗室自建方法：
- 明確BSA封閉液配制標準（5g/100mL TBST）
- 統一電泳參數（初始8V/cm，分離膠15V/cm）
- 規定成像判讀標準（背景均勻、條帶清晰不過曝）
實驗優化建議
針對常見問題提供解決方案：
| 問題現象 | 可能原因 | 標準推薦措施 |
|---|---|---|
| 條帶彌散 | 蛋白降解 | 嚴格保持4℃操作（5.6條款） |
| 轉膜不全 | 甲醇濃度不足 | 確保轉膜緩沖液含20%甲醇（5.15條款） |
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- 標準號
- GB/T 38477-2020
- 別名
- GBT38477-2020
GB38477-2020 - 發布
- 2020年
- 總頁數
- 8頁
- 發布單位
- 國家市場監督管理總局、中國國家標準化管理委員會
- 當前最新
- GB/T 38477-2020
- 引用標準
- GB/T 6682
本標準規定了用蛋白印跡(Western blot)法測定基因表達的方法原理.試劑或材料.儀器設備、測定步又和結果分析。本標準適用于動植物組織或體外培養細胞目的基因表達測定。
GB/T 38477-2020 中提到的儀器設備
專題
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