ASTM E2647-20
用低剪切和連續流動的滴流式生物膜反應器生長的銅綠假單胞菌生物膜定量的標準試驗方法
Standard Test Method for Quantification of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Grown Using Drip Flow Biofilm Reactor with Low Shear and Continuous Flow
1. 設備與試劑準備
滴流生物膜反應器(DFR) 核心組件：
- 反應室（含4個10.16×3.05cm通道）
- 聚碳酸酯頂蓋（配Mininert?閥門）
- 玻璃載片（25×75×1mm）
| 輔助設備 | 規格要求 |
|---|---|
| 蠕動泵 | 4通道，流量200mL/h |
| 均質器 | 20500±5000r/min |
| 恒溫搖床 | 35±2℃ |
2. 操作流程
2.1 反應器組裝與滅菌
- 將新載玻片放入反應室通道，頂部對準進料口
- 安裝頂蓋并松散固定螺絲（防止滅菌時變形）
- 121℃高壓滅菌20分鐘（液體循環模式）
2.2 生物膜培養
| 階段 | 參數 | 時間 |
|---|---|---|
| 批次培養 | 3000mg/L TSB+1%菌懸液 | 6h |
| 連續流培養 | 270mg/L TSB，50mL/h/通道 | 48h |
2.3 生物膜取樣
- 無菌取出載玻片，用 滅菌止血鉗 固定
- 在45mL緩沖液中輕柔漂洗去除浮游菌
- 用無菌刮刀刮取生物膜，重復3-4次
3. 數據分析
生物膜密度計算公式：
LOG10(CFU/cm2) = LOG10[(X/B)×(V/A)×D]
- X：平均菌落數
- B：平板接種量(mL)
- V：樣品終體積(mL)
- A：刮取面積(cm2)
精密度要求：實驗室間重復性標準偏差≤0.2682 log10
4. 注意事項
- 均質步驟需嚴格控制20500±5000r/min轉速
- 連續流階段反應器需保持10°傾斜角
- 不同菌種需優化培養參數
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- 標準號
- ASTM E2647-20
- 發布
- 2020年
- 總頁數
- 6頁
- 發布單位
- 美國材料與試驗協會
- 當前最新
- ASTM E2647-20
- 引用標準
- ASTM D5465
1.1 本測試方法規定了在反應器中靠近空氣/液體界面處生長可重復的銅綠假單胞菌生物膜所需的操作參數，該反應器在低流體剪切條件下具有連續的營養物流。所得生物膜代表了一般情況，其中生物膜存在于低流體剪切下的空氣/液體界面處，而不是代表一種特定環境。 1.2 本試驗方法采用滴流式生物膜反應器。滴流生物膜反應器 (DFR) 是一種活塞流反應器，具有層流，導致低流體剪...
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