溶解曲線的峰代表什么
溶解曲線的峰代表:當溫度高于擴增產物的TM值時,雙鏈產物變單鏈,熒光值因為這樣的變化而產生變化,根據這一原理,推算體系是是否會在溫度變化時產生熒光值的變化。
比如用的是TAQMAN探針,taqman探針產生熒光變化的原理是探針被外切酶活性的TAQ酶剪切斷而產生的,那么在只有溫度變化的情況下,是沒有熒光值變化的,自然就沒有溶解曲線了。但是假如用的分子信標探針或者sybgreen燃料,情況就不同了。
應用
分析real time PCR 結果的特異性:出現單峰說明擴增產物特異性好,出現雜峰特異性差,存在非特異性擴增,如引物二聚體等。一般是用SYBR Green作為熒光染料的時候使用,因為SYBR Green染料是非特異的染料,只要有擴增,染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。
做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰,且出峰位置是你的退火溫度,那么這個是你的產物發出的熒光,實驗結果有效。
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