怎么通過Q-PCR的擴增曲線和溶解曲線來分析結果
1、擴增曲線（如果做雙ΔCT法）：
（1）擴增曲線必須是S型，有明顯的四個時期，且復孔的CT值盡量一致，相差不要超過0.5個CT值（上限是1個CT值）；
（2）同一個基因在不同濃度的相同模板下擴增，其相差的CT值為相差濃度倍數的2次開方。當然這是理論值；另外陰性對照不能有擴增（40個循環以后出CT值屬正常現象，也可算作沒有擴增）。
2、溶解曲線：
（1）溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關系，擴增什么基因就應該有其相對應的溶解曲線；
（2）一般SYBR法的目的基因在80~90℃之間；
（3）出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組DNA污染的峰會在90℃以后。出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因所致；
（4）基因組DNA那么考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gDNA的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板污染，注意實驗操作等避免模板污染。
3、溶解曲線是為了驗證擴增產物特異性的，要是溶解曲線是單峰說明產物只有一條，結果較好；要是雙峰說明產物不特異，可能存在引物二聚體或非特異性擴增，有可能引物設計有問題。
推薦
-
焦點事件
