熒光定量pcr溶解曲線沒有峰
熒光定量pcr溶解曲線沒有峰是因為:一般每加溫一度,讀一次信號,當溫度到達PCR產物的Tm時,產物解離一下增多,曲線的橫坐標是溫度,縱坐標是熒光信號的變化,開始加熱,信號變化不大,所以幾乎是平的。
當加熱接近于PCR產物Tm時,雙鏈開始解離,熒光強度變小,機器會比較前后2個溫度點的熒光強度,把2者的差值標在圖上。Tm到達時,有一般雙鏈解離,這時的熒光強度變化最大(峰值)。再加熱,雙鏈全部解離,所以熒光強度的變化又變小了。
技術原理
將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中。
在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度,求得Ct值,同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照,即可得出待測標本目的基因的拷貝數。
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