轉座子 Tol2 的轉座機制與轉座優勢詳述（二）
當然，實踐是檢驗真理的唯一標準，2009年，Zoltán Ivics等[3]就為大家詳細闡述了Tol2轉座機制在鼠中的應用，具體流程如圖3，通過不斷地表型篩選，Tol2系統可以用于構建轉基因鼠和穩定的基因表達細胞系。?
圖3 利用Tol2構建轉基因鼠和基因表達細胞系[3]
3、Tol2轉座優勢
與傳統的轉基因方法相比，Tol2轉座子法優勢明顯，主要表現在以下幾方面：
相對更高的轉基因效率
不同品系小鼠中，同一轉座子的轉座效率存在差異，相同品系小鼠中，Tol2較SB、PB在生殖細胞中的轉座效率更高[4]?，如表1。
表1 不同轉座子在生殖細胞中的轉座效率
無位點特異性
相較于PB、SB，Tol2轉座子靶點的選擇性更高，沒有明顯的位點特異性（8-bp的雜合堿基序列），在染色體上比較傾向整合于基因的5＇端區域[3]，如表2。
表2 ?SB,PB和Tol2的基因組位點特異性比較
無堿基傾向性
Tol2轉座子，插入位點的堿基序列可以不同，沒有明顯的堿基傾向性[5]。如表3。
表3 Tol2插入位點的堿基傾向性
無過度抑制效應
如下表4所示，隨著轉座酶與轉座子的比例增大，PB轉座效率逐漸飽和甚至出現下降趨勢，表明過量表達的轉座酶會抑制PB的轉座反應，即過度抑制效應，但Tol2較之轉座效率不受影響， 沒有出現抑制效應[6]。
表4 ?PB，Tol2轉座抑制效應比較
?
除此外，tol2轉座無需絕緣子，可攜帶大片段外源DNA，目前百奧賽圖已利用該系統成功將13kb外源DNA片段轉入小鼠體內！
【參考文獻】
[1] Koga A. and Hori H. The Tol2 transposable element of the medaka fish: an active DNA-based element naturally occurring in a vertebrate genome[J]. Genes & Genetic Systems, 2001, 76:1-8.
[2] DNA transposon-based gene vehicles - scenes from an evolutionary drive. J Biomed Sci. 2013 Dec 9;20:92.
[3] Transposon-mediated Genome Manipulations in Vertebrates. Nat Methods. 2009 June ; 6(6): 415–422.?
[4] Efficient transposition of Tol2 in the mouse germline. Genetics. 2009 Dec;183(4):1565-73.?
[5] A simple and highly efficient transgenesis method in mice with the Tol2 transposon system and cytoplasmic microinjection. Genomics. 2010 May;95(5):306-11.?
[6]. Efficient genetic modification and germ-line transmission of primordial germ cells using piggyBac and Tol2 transposons. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jun 5;109(23):E1466-72.
