溫度和pH 對唾液淀粉酶活性的影響實驗
實驗方法原理 酶都是蛋白質,它的活性受環境pH的影響極為顯著。通常各種酶只有在一定的pH范圍內才表現它的活性,一種酶表現其最高活性時pH的值,稱為該酶的最適pH。
實驗材料 淀粉
試劑、試劑盒 碘 碘化鉀 磷酸氫二鈉 檸檬酸
儀器、耗材 試管 吸量管 試管架 吸耳球
實驗步驟
溶液配制:
0.5%淀粉溶液(含0.3%氯化鈉)(新鮮配置),碘-碘化鉀溶液(4 g碘及碘化鉀6 g溶于100 ml蒸餾水中,于棕色瓶中保存),0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液,0.1 mol/L檸檬酸溶液。
1. ?樣品收集
漱口后收集唾液,用漏斗加少量脫脂棉過濾,濾液稀釋100倍備用。
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2. ?pH對酶活性的影響
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(1)緩沖液的配制
(2)底物的準備
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6支干燥的試管編號,依次加入不同 pH 的緩沖液各3 ml,第6號試管與第3號相同。再向每個試管中添加0.5%淀粉溶液2 ml,搖勻。
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(3)酶促反應時間測定
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向第6號試管加入稀釋100倍的唾液2 ml,搖勻后放入37 ℃恒溫水浴中保溫。每分鐘取1滴混合液于白瓷板上,加1滴碘化鉀-碘溶液,呈橙黃色時取出試管,記錄時間。
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(4)最適 pH 測定
以1 min的間隔,依次向1~5號試管中加入稀釋200倍的唾液2 ml,搖勻,同樣以1 min間隔,將5只試管放入37 ℃恒溫水浴中保溫,反應至所需時間。依次取出,立即加入碘化鉀-碘液2滴,充分搖勻。觀察顏色,可看出不同pH值時淀粉被水解的程度,不同pH值對唾液淀粉酶活性的影響,并確定其最適pH。
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3. 溫度對酶活性的影響
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(1)取三支試管按下表操作:
加畢,分別按上述條件繼續放置10 min。
(2)從三支試管中取出溶液1滴于反應板上,加上1滴碘液,觀察呈色現象,記錄結果并解釋其原因。